一恒分析哮喘患儿急性发作期鼻病毒感染的临床

急性哮喘加重( acute asthma exacerbation，AAE) 通 常由呼吸道病毒感染引起，特别是鼻病毒( ＲV) 。有 研究表明，儿童中 80% ～ 85% 的 AAE 与上呼吸道病 毒感染引起的峰值流量减少和喘息有关，约 80% 的学 龄儿童和 50% 的成人在喘息期也检测到 ＲV。ＲV 对过敏性哮喘患者气道的影响是通过促炎因子和炎性 细胞因子介导，诱导气道炎症过程加重哮喘严重程度 和 AAE。ＲV 感染后哮喘患者气道内炎性细胞增多 以应对炎症过程，这些细胞包括嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞。有研究表明，哮喘患者支气管肺 泡灌洗后数日内白细胞水平高于健康受试者。此 外，依赖 Th2 和 Th1 的免疫反应紊乱可能在哮喘合并 ＲV 患者炎症过程的调节中发挥重要作用。到目前 为止，虽然已有许多关于呼吸道病毒在儿童急性哮喘 发作中的作用的研究得到证实，但对于 ＲV 诱导的 AAE 患者的炎性反应，特别是细胞因子作用的研究还 很少，本研究描述了 AAE 期间有 ＲV 感染的哮喘儿童 的临床特征和细胞因子变化。

1 资料与方法

1． 1 一般资料

以 2016 年 12 月至 2018 年 12 月我 院收治的 ＜ 15 岁 AAE 患儿 115 例为研究对象，其中男 75 例( 65． 2% ) ，女 40 例( 34． 8% ) ; ＜ 2 岁 24 例 ( 20． 9% ) ，2 ～ 5 岁 52 例 ( 45． 2% ) ，＞ 5 岁 39 例 ( 33． 9% ) 。排除患有较严重疾病( 甲亢、心律失常、先 天性心脏病、风湿性心脏病等) 、因其他原因( 心力衰 竭、气胸、气道异物阻塞等) 急性发作的住院的哮喘患 儿或因其他病毒( 呼吸道合胞病毒或流感病毒) 感染 阳性的 AAE 患儿。选择来本院做健康体检无任何急 慢性疾病的健康儿童 30 例为对照组。比较 AAE 患儿 与健康对照组的临床特点及细胞因子水平。本研究经 本院伦理委员会批准，所有患者同意参加研究并签署 知情同意书。

1． 2 ＲV 感染及哮喘严重程度诊断

通过实时聚合 酶链反应( PCＲ) 检测鼻咽吸液中鼻病毒。所有儿童在 住院第 1 天均接受鼻咽抽吸，鼻咽吸液是在鼻与耳垂 之间的中段，用一根经过消毒的管子经鼻进入鼻腔收 集。每个研究对象吸入 5 ml 鼻咽液。采用 CFX96TM 实时系统 CC3071( Bio-Ｒad，Hercules，CA，USA) 对鼻咽 液进 行 分 析，诊 断 ＲV 感 染。根据小儿哮喘评分 ( PAS) 评定 AAE 的严重程度。检查包括呼吸速率、 耗氧量、呼吸肌收缩、听诊、呼吸困难等五部分内容，根 据这些症状的严重程度，每一项评分为 1 ～ 4 分，5 ～ 7 分为轻度哮喘发作，8 ～ 11 分为中度哮喘发作，12 ～ 15 分为重度哮喘发作。

1． 3 外周血细胞因子定量

细胞因子定量采用流式 细胞辅助免 疫 分 析 技 术 和 Bio-Plex 系 统 ( Bio-Ｒad， Hercules，CA，USA) 。使用不含抗凝剂的试管采集2 ml 患者静脉血样本，然后直接送到实验室进行分析。将 没有抗凝血剂的血液样品置于培养箱 ( 37℃ ) 中 30 min，然 后 在 1 000 g，4℃ 下 离 心 5 min，然 后 在 10 000 g，4℃下离心 15 min 并准备冷冻。将所有样品 储存在-80℃直至测试。通过夹心技术在聚苯乙烯微 球表面上通过免疫荧光检测细胞因子。基于从已 知浓度的细胞因子温育的微球发射的荧光密度，使用 Bio-Plex Manager TM 软件( Bio-Ｒad) 定量研究样品中 的细胞因子。对于每种细胞因子，用国际细胞因子标 准建立曲线拟合参数，并使用主曲线分析免疫测定 数据。

1． 4 统计学分析

应用 SPSS 19． 0 统计软件，计量资 料以 x珋± s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进 一步两两比较采用 LSD 法，计数资料组间比较采用列 联表 χ2 检验，P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。

2 结果

2． 1 哮喘患儿ＲV 感染的临床及生物学特征

本研 究共纳入了 115 例哮喘儿童，有湿疹 58 例( 50． 4% ) ，有过敏性鼻炎 77 例( 67． 0% ) ，有季节性变态反应 110 例( 95． 7% ) ; 根据 PAS 评分有 19 例( 16． 5% ) 患儿为 轻度 哮 喘，38 例 ( 33． 1% ) 患儿为中度哮喘，58 例 ( 50． 4% ) 患儿为重度哮喘。鼻病毒阳性( ＲV + ) 患儿 63 例 ( 54． 8% ) ，鼻 病 毒 阴 性 ( ＲV － ) 患 儿 52 例 ( 45． 2% ) 。ＲV + 哮喘患儿与 ＲV － 哮喘患儿在年龄、 性别、湿疹、过敏性鼻炎、季节性变态反应、二手烟暴露 等方面差异无统计学意义( P ＞ 0． 05) 。2 ～ 5 岁儿童 急性哮喘发作中 ＲV + 患病率最高，占52． 4% ，＜ 2 岁 儿童急性哮喘发作中 ＲV + 患病率最低，占 17． 4% 。 ＲV + 哮喘患儿与 ＲV － 哮喘患儿在哮喘评分、白细胞 升高、多形核白细胞升高等方面差异有有统计学意义 ( P ＜ 0． 05) 。见表 1。

2． 2 ＲV 感染对哮喘患儿细胞因子谱的影响

结果 显示，非 Th2 相关细胞因子 IL-2 在哮喘患儿中无论有 无 ＲV 感染均显著低于对照组( P ＜ 0． 05) ，ＲV － 、ＲV + 哮喘患儿 IL-8、IFN-γ 水平与对照组比较差异无统 计学意义( P ＞ 0． 05) 。有或无 ＲV 感染的哮喘儿童 TNF-α 水平高于对照组，而 ＲV-哮喘患儿中 IL-10 水平 高于对照组和 ＲV + 的哮喘患儿，差异均有统计学意 义( P ＜ 0． 05) 。ＲV-和 ＲV + 哮喘患儿 Th2 相关细胞因 子 GM-CSF 水平与对照组比较无差异( P ＞ 0． 05) ，但 IL-4 水平与对照组比较显著升高( P ＜ 0． 05) 。ＲV + 哮喘患儿 IL-5、IL-13 水平显著高于 ＲV-和对照组哮喘 患儿，差异均有统计学意义( P ＜ 0． 05) 。

3 讨论

研究表明，大多数急性哮喘发作是呼吸道病毒 引发的，尤其是鼻病毒。本研究结果发现，54． 8% 的 AAE 患儿感染了 ＲV。Hewitt 等研究发现 ＲV 使 急性哮喘发作的风险增加了 9． 8 倍。此外，在 3 岁以 上的儿童中，与 ＲV 感染相关的哮喘发作的风险增加 了 25． 6 倍。Chen 等对 128 例急性哮喘加重儿童和 192 名健康儿童进行了病毒分离，结果显示 84． 9% 的 哮喘患儿为 ＲV 阳性，而对照组为 33% 。这些结果表 明 ＲV 感染可能是急性哮喘发作的主要诱因。ＲV 感 染是哮喘急性发作期间炎症细胞增加的主要原因。既 往研究表明，急性哮喘发作患者痰液细胞有 ＲV 感染， 多形核白细胞和嗜酸性粒细胞明显增多。本研究 外周血分析显示 ＲV 感染的 AAE 患儿的多形核白细 胞显著增加，与没有 ＲV 感染的儿童相比，尽管 ＲV + 哮喘患儿嗜酸性粒细胞增加百分比高于 ＲV-的哮喘患 儿，但没有显著性差异。