水浴锅使用于时测定栀陈消瘿胶囊的分析

栀陈消瘿胶囊是由柴胡、赤芍、茯苓、黄芩、当归、牡丹皮、栀 子、陈皮等十二味药组成，有消瘿抑亢、平衡阴阳的功效，主要用 于甲状腺机能亢进。方中栀子、赤芍、陈皮均发挥重要作用，栀 子中的栀子苷具有镇痛和抗炎的作用；赤芍中的芍药苷具有 保肝、抗肿瘤、神经保护、心脏保护、抗血栓、抗氧化的作用；陈 皮中的橙皮苷具有抗动脉粥样硬化及抗炎、抗氧化、抗菌、抗 癌、调节免疫力、防辐射、保护心血管系统的作用。为了完善该 制剂的质量标准，控制质量，确保临床应用安全有效，本文建立 了同时测定该制剂中栀子苷、芍药苷和橙皮苷三种成分含量的 高效液相色谱法。

LC-20AT 高效液相色谱仪，配备 SPD-20A UV/VIS 检 测器（日本 SHIMADZU 公司）；METTLER TOLEDO MS205DU 电 子天平 （梅特勒-托利多仪器有限公司）；BWS-10 恒温水浴锅 （上海一恒科技有限公司）。

栀子苷对照品（批号：110749-201316，中国食品药品 检定研究院，含量 97.5%），芍药苷对照品 （批号 110736- 200410，中国食品药品检定研究院），橙皮苷对照品 （批号 110721-201115，中国食品药品检定研究院，含量 95.3%）；栀陈 消瘿胶囊 3 批，批号分别为 161220，170424，170619；水为纯化 水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

色谱柱为 InertSustain C18 Superb（4.6mm×250mm； 5μm）；以乙腈（A）-0.2%磷酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱， 梯度洗脱程序为：0～15min，15%A；15～35min，20%A。检测波长： 0～15min 为 240nm，15～35min 为 283nm。柱温为 35℃；流速为1.0mL·min-1。

取栀子苷、芍药苷、橙皮苷对照品适 量，精密称定，分别置 50mL 量瓶中，加甲醇制成浓度为 0.1997mg·mL-1、0.1780mg·mL-1、0.1990mg·mL-1 的对照品储备溶 液，临用前，精密吸取上述 3 种对照品储备溶液各 1mL，置 5mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

取本品内容物适量，研细，取约 2g，精 密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50mL，称定重量， 加热回流 60min，取下，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失 的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

取缺栀子、赤芍、陈皮的阴性样品， 按“2.2.2”项下的方法操作，制得阴性对照溶液。

分别精密吸取对照品混合溶液、供试品溶液和 阴性对照溶液各 10μL，按规定的色谱条件进样。色谱图表明，供 试品溶液中，在与栀子苷、芍药苷、橙皮苷对照品相应位置上有 保留时间一致的色谱峰，阴性对照溶液无干扰。2.4 线性关系考察：分别精密吸取对照品混合溶液 1、5、10、20、 30μL，注入高效液相色谱仪，按规定的色谱条件测定峰面积。以 进样量（μg）对峰面积（A）进行线性回归，得栀子苷回归方程为 Y=2×106X+4353.5，r 2 =0.9999，芍药苷回归方程为 Y=1×106X217.98，r 2 =1，橙皮苷回归方程为 Y=2×106X+52.03，r 2 =1，结果表 明，栀子苷在 0.0399～1.1970μg 范围内线性关系良好，芍药苷在 0.0356 ～1.068μg 范围内线性关系良好，橙皮苷在 0.0398 ～ 1.194μg 范围内线性关系良好。

栀子苷、芍药苷、橙皮苷的含量测定，现多 采用反相高效液相色谱法，栀子苷流动相为乙腈-水（15∶85），检 测波长为 238nm、芍药苷流动相为甲醇-0.05mol/L 磷酸二氢钾 溶液（40∶65），检测波长为 230nm、橙皮苷流动相为甲醇-醋酸水 （35∶4∶61），检测波长为 283nm 。实验发现检测波长采用240nm 时得到的栀子苷和芍药苷的峰高合适；但检测不到橙皮 苷。波长采用 283 时得到的峰高合适；但栀子苷和芍药苷峰高 较低。故采用双波长。

本研究曾选用不同比例的乙腈-水、乙腈0.2%磷酸溶液、乙腈–0.5%冰醋酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶 液、甲醇-水溶液等系统为流动相作了系统地比较，结果表 明，以乙腈-0.2%磷酸溶液（15∶85）作为流动相时，栀子苷、芍药 苷、橙皮苷峰形较好，分离度也好。因此，选择乙腈-0.2%磷酸溶 液（15∶85）作为流动相。

本研究在供试品溶液的制备过程 中，曾选用甲醇、70%甲醇、60%甲醇、70%乙醇、60%乙 醇分别加热回流 60min，结果所得供试液色谱基本一致，以 70%甲醇为溶剂加热回流 60min 测定的含量最高。再以甲醇 为溶剂分别加热回流 20min、30min、60min， 结 果 加 热 回 流 20min 与 加 热 回 流 30min 的供试液测定值低于加热回流 60min。故确定以 70%甲醇加热回流提取 60min 作为制备供试 品溶液的条件。