不同培养箱对大肠埃希菌生长的影响
来源：未知
发布日期：2019-04-15 12:02【大 中 小】
大肠埃希菌（革兰氏阴性短杆菌），俗名大肠杆菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢，是人和动物肠道中的正常栖居菌。 大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。 根据致病性的不同， 致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、 肠集聚性黏附性大肠埃希
菌和肠出血性大肠埃希菌 5 种。 部分埃希菌菌株与婴儿腹泻有关， 并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。在实际工作中， 常用到培养箱对各种样品进行培养分离， 而不同原理的培养箱对大肠埃希菌的生长有不同的影响。 其中，常用的培养箱有 3 类：隔水式培养箱、电热式培养箱、生化培养箱。
隔水式培养箱:
是具有高精度的恒温设备， 其温度波动范围为±0.5℃，可用于植物组织发芽、育苗、微生物的培养、昆虫和小动物的饲养、水质检测的生化需氧量（BOD）的测定及其他用途的恒温试验，是生物遗传工程、医药、农、林、环境科学、畜牧、水产等生产、科研、教育部门的理想设备。
电热式培养箱:
的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成， 电热式培养箱的夹层用石棉或玻璃棉等绝热材料制成， 以增强保温效果， 培养箱顶部设有温度计，用温度控制器自动控制，使箱内温度恒定。 直接电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热， 利用空气对流，使箱内温度均匀，其温度波动范围为±2℃。
生化培养箱:
具有制冷和加热双向调温系统，温度可控的功能，其温度波动范围为±2.5℃，是生物、遗传工程、医学、卫生防疫、环境保护、农林畜牧等行业的科研机构、大专院校、生产单位或部门实验室的重要试验设备， 广泛应用于低温恒温培养、 培养试验、 环境试验等试验过程中。 生化培养箱控制器电路由温度传感器、电压比较器和控制执行电路组成。虽然 3 种培养箱都可以培养大肠埃希菌， 但是3 种培养箱的加热方式不一样，温度波动范围不同，对大肠埃希菌的生长有一定的影响。
材料与方法
1. 仪器
生物安全柜；电热式培养箱（DH6000B，上海一恒科学仪器有限公司）；隔水式培养箱（HENGZi，上海一恒科学仪器有限公司）；生化培养箱（LRH-150F 智能型，上海一恒科学仪器有限公司）。 试剂与材料大肠埃希菌标准菌株（ATCC25922）；营养琼脂（170103）；乳糖蛋白胨培养基（170517）；灭菌生理盐水（201702140）。1 菌种的活化将冻藏的大肠埃希菌标准菌株磁珠用接种环取出， 用接种环把大肠埃希菌标准菌株磁珠在营养琼脂平板上分区划线。 把划线的营养琼脂平板放入（37±0.5）℃培养箱培养 24 h。
2. 菌液的制备以及菌落的计数
挑取菌落到 1 mL 灭菌磷酸缓冲液中。 从菌悬液中吸取 0.5~4.5 mL 灭菌生理盐水中，制成 1∶10 的稀释液，然后逐一 10 倍稀释到 10-7 麦氏比浊度。 取 10-7 麦氏比浊度的稀释液采用多管发酵法完成实验。 取样量分别为 1 mL、0.1 mL、0.01 mL。 每次试验做 3 份多管发酵法试验，共做 7 次。 每次试验的 3 份多管发酵法试验分别放入隔水式培养箱、 电热 培 养 箱、 生 化 培 养 箱 中，44.5℃培养 24 h。 同时吸取 10-7 麦氏比浊度的稀释液 2 mL，分别于 2 个平皿各 1 mL，每个平皿倾注约15 mL 已融化并冷却到约 45℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使稀释液与培养基充分混匀，待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于 44.5℃培养内培养 48 h，进行菌落计数，共做 7 次。
3.温度的记录
从早上开始上班时记录不同培养箱的的温度，每隔 1 h 记录一次。隔水式培养箱培养大肠埃希菌的 MPN 值与平皿菌落总数相比较，差异无统计学意义（t=1.807，P＞0.05）（t 为样品平均数与总体平均数的离差统计量；P 为假设两组比较无差异的概率）； 电热式培养箱和生化培养箱培养大肠埃希菌的 MPN 值与平皿菌落总数相比较， 差异有统计学意义 （t=2.700、5.004，P＜0.05）。由上述实验结果可知， 培养箱温度的波动情况对大肠埃希菌在的生长有很大的影响。 使用温度波动范围小的培养箱进行培养时， 用多管发酵法得到的大肠埃希菌的 MPN 值的 RSD 值相对较小， 结果值相对稳定； 同时用多管发酵法得到的大肠埃希菌的 MPN 值与平皿得到的菌落数相比较，差异也无统计学意义。 但是在温度波动范围大的时候， 多管发酵法得到的大肠埃希菌的 MPN 值的 RSD 值相对较大，说明结果值不稳定，可靠性不高；同时，在温度波动范围大的时候， 用多管发酵法得到的大肠埃希菌的 MPN 值与平皿得到的菌落数相比较，差异有统计学意义，同样也说明结果值不可靠。
综上所述， 培养箱是大肠埃希菌生长繁殖的良好场所，但是温度波动大小对大肠埃希菌的生长有很大的影响，温度波动太大时，得到的结果值的可靠性不高。 因此，在对分离培养大肠埃希菌时，应尽量选择温度波动范围较小的培养箱。
