风湿痹痛膏质量控制研究(一恒DHG-9240A使用)

风湿痹痛是临床常见的病症之一，由于其具反复发作 的特点，需要长期用药，而长期服药容易蓄积中毒。针灸法 是临床治疗风湿痹痛证常用的方法之一，具有安全、经济、 简便、毒副作用小等众多优点，逐渐受到国内外医学界的 关注。临床中常采用针灸配合中药联合治疗，如中药汤 剂辅助艾灸、中药贴膏辅助针灸等。隔膏灸是在艾灸基 础上发展起来的一种针灸方法。治疗风湿关节病的药膏具 有发散风寒，袪湿止痛的作用；艾灸亦有温热作用，两者合 而为之，相辅相成，更易促进药物的吸收，达到通经活络、 治疗风湿痹痛的作用。

1 仪器与材料 

1.1 仪器 

Milli-Q 超纯水系统 （德国墨克生命科学公司）；BT125D 电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；一恒DHG-9240A 型电 热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；DT1028H 型 超声波清洗器（德国 BANDELIN 有限公司）；HHS-11S 数显 恒温水浴锅（上海宜昌仪器纱筛厂）；玻璃仪器气流烘干器 （上海豫康科教仪器设备有限公司）；Agilent 1100 Series 型 高效液相色谱仪 （美国 Agilent 科技有限公司），DAD 检测 器；WFH-201B 紫外反射透射仪（上海精科实业有限公司）。 

1.2 材料

乙腈、甲醇、异丙醇均为色谱纯（天津市大茂化学试剂 厂）；三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、浓氨试液、环己烷等均为 分析纯（天津市大茂化学试剂厂）；水为超纯水（Milli-Q 超 纯水系统）；硅胶 GF254 板（青岛海洋化工厂分厂）；自制 含 1%氢氧化钠溶液的硅胶 G 板；5%香草醛硫酸溶液（新 制）；芍药苷对照品（批号：170829，含量>98%，中国食品药 品检定研究院）；延胡索乙素对照品 （批号：18012213，含 量>98%，中国食品药品检定研究院）；炒白芍、醋延胡索、 雷公藤等研究所用药材饮片均购自佛慈养生堂，经甘肃中 医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定均为正品。 

2 方法与结果 

2.1 风湿痹痛膏的制备工艺 

按处方药量称取炒白芍、醋延胡索、制草乌等 6 味中 药，加 6 倍量纯化水，浸泡 1 h，回流提取 1 次，提取 1.5 h，静置沉淀，滤过，将滤液浓缩，得到相对密度为 1.21～1.24 的浸膏，加入 5 g 土鳖虫粉，混匀，文火煎熬至规定的 相对密度（不低 1.31），冷却，即得。 

2.2 TLC 鉴别 

2.2.1 炒白芍的鉴别

 取风湿痹痛膏 0.5 g，加 50%甲醇 50 mL，超声（50 kHz、25 ℃）处理 20 min，取上清液作为供 试品溶液。取缺炒白芍阴性样品，按供试品制备方法制成 阴性对照溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成 1 mg/mL 的对照品溶液。分别吸取上述溶液 10 μL，点于同一硅胶 GF254 薄 层 板 上 ， 以 三 氯 甲 烷 - 乙 酸 乙 酯 - 甲 醇 - 甲 酸 （40.0∶5.0∶12.0∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5 % 香草醛硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色 谱中，与对照品相应的位置处，显示相同的蓝紫色斑点，且 阴性无干扰。见图 1。

2.2.2 醋延胡索的鉴别 

取 0.5 g 风湿痹痛膏，加浓氨试 液 5 mL，三氯甲烷 60 mL，超声（50 kHz、25 ℃）处理 20 min， 滤过后蒸干，加甲醇 1 mL，即得供试品溶液。另取延胡索 乙素对照品，加甲醇制成 0.5 mg/mL 的对照品溶液。分别 吸取上述溶液 10 μL，点于同一用 1%氢氧化钠溶液制备 的硅胶 G 薄层板上，以浓氨试液-乙酸乙酯（6∶4）为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰，挥 尽碘后，在紫外光（365 nm）下检视。发现供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑 点。阴性无干扰。见图 2。

3 讨论 

3.1 白芍鉴别考察了不同提取溶媒 （甲醇、50 %甲醇和 乙醇），比较发现以乙醇为溶媒，所得图谱斑点清晰，因此 供试品溶液制备选用乙醇提取；采用 2015 版《中华人民共 和国药典》一部薄层色谱法（通则 0520）展开剂展开，分离 效果较差，Rf 较小，进而加大了流动相的极性，所以增加 甲醇的用量，最终选择氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸 （40.0∶ 5.0∶12.0∶0.2）为展开剂，分离良好，斑点清晰可见，此外， 建议炒白芍薄层应先喷洒 5%香草醛硫酸溶液，之后在 105 ℃加热，以使色谱点更清晰。 

3.2 延胡索鉴别参照 《中华人民共和国药典》2015 年版 一部方法，得到的醋延胡索的 TLC 图分离度差，斑点不清 晰，拖尾严重，可能是受处方中其他药材的影响，复方中 单味药的薄层鉴别按照《中华人民共和国药典》方法，其 结果不太理想。最终选择浓氨试液-乙酸乙酯 （3∶2）为展开剂，在该条件下供试品分离度好、斑点清晰， 因此选用该展开体系作为醋延胡索的薄层展开条件。 

3.3 风湿痹痛膏中芍药苷含量最高为 3.38%，最低为 2.00%， 平均为 2.77%，因此，建议风湿痹痛膏中芍药苷含量应不 低于 1.94%。

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