荷叶薄层色谱鉴别方法分析（一恒HWS-24使用）

荷叶为睡莲科植物莲（Nelumbo nuciferea Gaertn）的干 燥叶，来源广泛，价格低廉，其含有生物碱、皂苷、黄酮类、 挥发油等复杂的化学成分。味苦、性平，归肝、脾、胃经，具 有清暑化湿、凉血止血的功效，抗氧化、抗病毒和降脂等 生物活性，药食两用，在荷叶入药的制剂中，通常采用 薄层色谱法进行鉴别，试验拟对中兽药口服液中荷叶鉴别 进行质量研究，制定产品质量标准。

1 材料与方法 

1.1 主要试剂和仪器

 WFH-203B 型三用紫外分析仪（上海精科实业有限公 司）；薄层展开缸；一恒HWS-24 型电热恒温水浴锅（上海一恒 科学仪器有限公司）；AUW -120D 型 电 子 天 平 （日 本 岛 津）；硅胶 G 薄层板分别购于青岛海洋化工有限公司、烟台德信生物和德国默克公司；氯仿、丙酮、浓氨等分析纯试 剂购于广州市化学试剂厂；纯净水，购于屈臣氏；荷叶对照 药材：批号：121322-200402，购于中国食品药品检定研究 院；中兽药口服液供试品，实验室自行研制产品，由荷叶、 甘草等 8 味药材经过一定的工艺制备而成。 

1.2 方法 

1.2.1 薄层色谱方法比较

 方法 1：供试品溶液制备：取供 试品 30 mL，置分液漏斗中，加氨水 10 mL，加三氯甲烷提 取 2 次，每次 40 mL，振摇提取，水浴加热，分取三氯甲烷 层，合并三氯甲烷提取液，蒸干，残渣加乙醇 1 mL 溶解， 作为供试品溶液。对照药材溶液制备：取荷叶对照药材 1 g， 加水 100 mL，煎煮 2 次，每次 30 min，合并水提液，浓缩至 约 30 mL，照供试品同法制备，作为对照药材溶液。阴性样 品溶液制备：取除荷叶的其余药材，经加工制备成缺荷叶 的阴性样品，按“供试品溶液制备”方法制备成阴性样品溶 液。照薄层色谱法，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性 样品溶液各 10 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以氯 仿-乙酸乙酯-甲醇-水 （3∶4∶2∶1）10 ℃以下放置的下层溶 液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘铋钾试液。 方法 2：供试品溶液制备：取本品 10 mL，加甲醇 30 mL， 水浴回流 30 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水 25 mL溶解，用 10%氢氧化钠溶液调节 pH 值至 10，加乙醚 30 mL 振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇 1 mL 溶解，作 为供试品溶液。对照药材溶液和阴性样品溶液制备同方法 1。照薄层色谱法，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性样 品溶液各 10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘和剂 的硅胶 G 薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液（9∶1∶0.2）为展 开剂，展开，取出，晾干。置碘蒸气中熏至斑点显色清晰。 方法 3：溶液制备同方法 2。照薄层色谱法，吸取供试 品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液各 10 μL，分别点 于同一硅胶 G 薄层板上，以氯仿-丙酮-浓氨试液（6∶2∶0.1）为 展开剂，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365 nm）下检视。 

1.2.2 耐用性试验 

考察不同温度、湿度、时间条件下以 及使用不同品牌 G 薄层板，薄层色谱图的稳定性。供试品 溶液、对照药材溶液和阴性样品溶液制备同“1.2.1”。照薄 层色谱法，吸取供试品溶液、对照药材溶液和阴性样品溶 液各 10 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以氯仿-丙 酮-浓氨试液（6∶2∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。置紫 外光灯（365 nm）下检视。

2 结果

以室内温度 为 25 ℃，室内湿度为 50%。供试品溶液与对照药材溶液配 制好后在 0 h 分别在厂家 1、厂家 2、厂家 3 硅胶 G 薄层 板点样，结果表明，使用不同厂家的硅胶 G 薄层板，对照 品溶液和供试品溶液斑点展开效果好，Rf 值适中，主斑点 清晰，无显著性影响。实验结果表明，在 0 h、8 h、24 h 不同时间 点样，对照品溶液和供试品溶液斑点展开效果好，Rf 值适 中，主斑点清晰，无显著性影响，说明制定的方法在配制好 的样品在 24 h 内点样，不影响结果。以青岛海洋化工 制造的硅胶 G 薄层板为固定相，室内湿度为 50%，供试品 溶液与对照品溶液配制好后在 0 h 点样，分别在室温 25 ℃、 室温 30 ℃、冰箱 4 ℃进行展开，结果表明，对照品溶液和 供试品溶液斑点展开效果好，Rf 值适中，主斑点清晰，无 显著性影响。

3 讨论 

关于荷叶薄层色谱鉴别的研究相对较少，《中 华 人 民共和国兽药典》2015 年版荷叶项下无荷叶薄层色谱鉴别，《中华人民共和国药典》2015 年版荷丹片和荷叶丸均 以荷叶碱作为对照品进行薄层色谱鉴别。试验参考阮时 宝等和田宏等建立的中药制剂中荷叶薄层色谱鉴别方 法，对研制的中兽药口服液中的荷叶进行质量研究。试验 结果显示，制定的薄层色谱鉴别方法清晰可见，分离度好 且阴性无干扰，稳定性好，对荷叶项能进行较好的质量控制。

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