呕吐毒素胶体金试纸条的评价(一恒DHG-9420A使用

呕吐毒素是主要由镰刀菌属（Fusarium） 产生的 一种 B 型单端孢霉烯族真菌毒素， 广泛存在于小 麦、 大麦和玉米等粮谷类食品中， 是主要真菌 性毒素污染物之一， 对人体的危害主要表现为恶 心、腹泻、呕吐等急性症状， 侵害机体免疫系统， 欧盟分类标准为三级致癌物。 当前， 全球有 30 余个国家针对食品或谷物中的呕吐毒素制定了相关 限量标准， 我国 GB 2761－2017规定了谷物及谷 物制品中呕吐毒素的限量标准为 1.0 mg/kg。 GB 5009.111－2016中规定了呕吐毒素的检测方法有 同位素稀释液相色谱－串联质谱法、 免疫亲和层析 净化高效液相色谱法、 薄层色谱测定法、 酶联免疫 吸附筛查法。

一、 实验部分 

（一） 材料、 试剂与仪器

 呕吐毒素免疫亲和 柱 （Romer Labs， MO， USA）； 脱氧雪腐镰刀菌烯（呕吐毒素） 标准品 （纯度>99％， Pribolab Pte. Ltd.Singapore） ； 甲 醇 （ 色 谱 纯 ， SCHARLAB S L）； 乙醇 （分析纯， 西陇科学股份有限公司）； NY 针头式过滤器（WondaDisc Ⅱ，SHIMADZU-GL）； 磷 酸缓冲液 （10 mM， pH 7.4， Sigma）。 本次评价实验使用的呕吐毒素快速检测试纸 条 / 卡， 采取网上咨询， 选择 4 家知名度较高的公 司的快检产品， 为避免评价结果对生产厂家造成影 响， 对快检产品进行了编序， 分别为 A、 B、 C、 D 公司。 高效液相色谱仪 （Agilent Technologies）； C18 色谱柱 （Analytical 4.6×150mm 5-Micron， Agilent Technologies） ； Milli-Q 超 纯 水 处 理 系 统 （ 美 国 Millipore）； 电热恒温鼓风干燥箱 （一恒DHG-9420A， 上海一恒科学仪器有限公司）； 电子天平 （QUINTIX213-1CN， 赛多利斯科学仪器有限公司）； 组织 粉碎机 （JYL-C16V， 九阳股份有限公司）； 震荡器 （MMV-1000W， 上海爱朗仪器有限公司）。 

（二） 呕吐毒素添加回收实验

 为确保仪器检 验盲样均匀性实验的准确度， 在盲样制备实验之前 先做呕吐毒素添加回收实验。 具体步骤为：（1） 选 取未检出呕吐毒素的大米， 经组织粉碎机研磨后过 筛 （0.6 mm）， 收集大米粉；（2） 制备 9 个样品， 平 均分成 3 组。 每组样品中添加呕吐毒素标准品， 终 浓度分别为 0.5、 0.8、 1.0 mg/kg；（3） 以国家标准 GB 5009.111－2016的第二法： 免疫亲和层析净 化高效液相色谱法对上述样品进行检测， 并计量样 品的添加回收率。 （三） 盲样制备 根据 《食品快速检测方法评 价技术规范》的要求， 本次评价实验所用盲样选 择大米粉作为基质。 该规范同时对测试水平的设置 提出了要求， 测试水平一般应包括食品基质空白样 品， 标准方法检出水平 （或者标准限量值） 的 0.5、 1、 2 倍水平或者其他可检测区分的水平 （不少于 3 个）， 或者方法标称检出限 0.5、 1、 2 倍水平或者 其他可检测区分的水平 （不少于 3 个）。 根据胶体 金免疫层析法的特性， 本次评价实验设置 4 个测试 水平， 分别为 0 mg/kg （空白样品）、 0.5 mg/kg （阴 性样品 1） 、 0.8 mg/kg （阴 性 样 品 2） 、 1.0 mg/kg （阳性样品 1）。

二、 结果与讨论 

（一） 添加回收实验结果 

为保证仪器分析方 法的科学性， 在开展评价实验前， 先验证呕吐毒素 在大米粉基质中的添加回收率， 结果见表 1。

（二） 均匀性检验结果 

按照 CNAS－GL003： 2018 对样品的均匀性和稳定性进行验证。 首先对 各浓度水平的盲样进行检测， 3 个浓度水平的回收 率分别为 91.2％、 104.5％、 102％ 。 然 后， 采用单因素方差分析法 （F －检验） 对数据进 行统计分析， 组间自由度为 5， 组内自由度为 12， 查看 GB/T 15000.5－1994的附录 B “F 检验法临 界值表”， F0.05（5，12）＝3.11， SPSS 软件分析实验结 果的 F 值分别为 2.68、 2.95、 0.76， 对应的 P 值分 别为 0.075、 0.058、 0.597 。 3 组浓度水平 的 F 值均0.05， 结果表明， 在 显著水平 α＝0.05 时， 同一浓度水平的所有样品间 无显著性差异， 即制备的样品是均匀的。 

（三） 样品的稳定性检验 

将不同储存时间样 品的检测平均值与初始检测平均值进行一致性比 较， 按照 CNAS－GL003： 2018中稳定性检验的 要求， 采用 t 检验法 “二个平均值之间的一致性” 公式计 算 t 值 。 查 GB/T 15000.5－ 1994 的附录 F “T 检验法分位数表”，t 0.05 （22）＝ 2.07， 计算的 t 值分别是 4.03、 4.71、 6.61， 所有 t 值均> t0.05 （22） ＝2.07， 表明各储存时间的检测结 果与初始检测结果之间存在显著性差异。 随着储存 时间的延长， t 值逐渐增大， 表明储存时间越长， 呕吐毒素的检测值变化越大， 在 1 周时间内， 检测值仅相差 0.075。 本研究制备的样品， 在 1 周时间 内完成对呕吐毒素快检产品的评价， 对评价结果不 会造成显著影响。

三、 结论 

采用空白大米粉基质加标的方法制备 4 种不同浓度水平的呕吐毒素样品， 对 4 个不同厂家 的胶体金免疫层析试纸条 / 卡进行评价测试。 根据 评价结果可知， 样品的添加回收率较高， 制备的盲 样均匀性良好， 快检产品的包装、 说明书、 试剂和 配备器具等完好， 产品的检测限符合标准要求， 现 场使用的适用性良好。 产品的假阴性率均为 0％， 假阳性率≥33％， 不符合快检方法指标的要求， 此 结果与胶体金免疫层析法的固有特点有关。 另外， 本研究发现样品浓度水平设置是决定评价结果的关 键因素， 快检行业亟需制定一套公认的、 科学合理 的评价方法。

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。