桑叶配方颗粒物质基准研究(DHG-9123A使用)

桑叶为桑科植物桑 ＭｏｒｕｓａｌｂａＬ．的干燥叶，具 有疏散风热、清肺润燥、清肝明目的功效，用于治疗 风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等。桑 叶中含有黄酮及黄酮苷类、生物碱类、多糖类等活性 成分。黄酮及黄酮苷类是桑叶的主要药效成分，含 有芦丁、异槲皮苷、紫云英苷、槲皮素等。现代药理 研究表明，桑叶具有抗凝血、调血糖、调血脂、抗病毒 等功效。

１ 主要仪器与试剂 

１．１ 仪器

 超高效液相色谱系统，美国沃特世公司提供； ＬＣ－１５Ｃ岛津高效液相色谱仪，日本岛津公司提供； Ｐｉｌｏｔ５－８Ｌ真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有 限 公 司 提 供；ＴＢ－２１５Ｄ 万 分 之 一 分 析 天 平、 ＢＳＡ２２４Ｓ－ＣＷ 十万分之一分析天平，北京赛多利斯 有限公司提供；ＪＹ１０００１电子天平，上海民桥精密科 学仪器有限公司提供；ＫＱ－２５０型超声波清洗器（功 率２５０ Ｗ，频率４０ｋＨｚ），昆山市超声仪器有限公司 提供；ＲＥ－３０００型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂 提供；ＢＪＨ－Ｗ２００Ｆ型陶瓷自动中药煲，广东天际电 器股份有限公司提供；梅特勒－托利多 ｐＨ 计，国际 贸易上海有限公司提供；一恒DHG-9123A 型电热恒温 鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司提供。

１．２ 试剂 

新 绿 原 酸 （批 号 为 ＰＹ２０１７０２２０，纯 度 为 ９９．７８％），咖 啡 酸 （批 号 为 １１０８８５－２００１０２，纯 度 为 １００．００％），绿 原 酸 （批 号 为 ＰＹ２０１７０２１６，纯 度 为 ９９．９６％），均购自中国食品药品检定研究院；芦丁 （批号为 ＭＵＳＴ－１６０３１８１３），购自成都曼斯特生 物 科技有限公司；异槲皮苷（批号为１６０５２４０７）、紫云 英苷（批号为１５０７１２），均购自成都普菲德生物技术 有限公司；槲皮素－３－Ｏ－（６″－Ｏ－丙二酰基）－β－Ｄ－葡萄 糖苷（批号为１７０９２４），购自上海源叶生物技术有限 公司；色谱甲醇、色谱乙腈、色谱纯磷酸，Ｆｉｓｈｅｒ化学 试剂公司提供；超纯水，自制；其他试剂均为分析纯。 １５批桑叶饮片均由神威药业集团有限公司统 一采购提供，经河北省药品检验研究院孙宝惠主任 药师鉴定为桑科植物桑 Ｍｏｒｕｓａｌｂａ Ｌ．的干燥叶， 饮片信息见表１。

２ 方法与结果

称取１５批次的桑叶饮片各约１００．０ｇ，煎煮２ 次。第一煎加１２倍量的水，浸泡３０ｍｉｎ，煮沸后煎 煮２０ｍｉｎ，用０．０７４μｍ（２００目）滤布趁热滤过，将 滤液置于水浴中迅速冷却；第二煎加１０倍量的水， 煮沸后煎煮２０ｍｉｎ，用０．０７４μｍ（２００目）滤布趁热 滤过，将滤液置于水浴中迅速冷却。合并滤液，减压 浓缩（温度为５０ ℃）成浸膏（投料量∶浸膏体积＝ １ｇ∶２ｍＬ）的，测定其ｐＨ 值、密度，冷冻干燥后，即 得物质基准干膏粉。按照式（１）计算出膏率，并测定 物质基准水分，见表２。分别精密称取芦丁对照品、异槲皮苷对照品和 紫云英苷对照品适量，加色谱甲醇溶解并定容，制成 每ｌｍＬ含芦丁０．０２０９ ｍｇ、异槲皮苷０．０４５０ ｍｇ 和紫云英苷０．０１０２ｍｇ的混合对照品溶液。

３ 讨 论 

３．１ 供试品溶液的制备

 由于桑叶物质基准在制备过程中标志性成分已 被煮提出来，因此制备供试品溶液时采用超声溶解 即可，对提取溶剂和超声时间进行考察。结合《中华 人民共和国药典》２０１５年版桑叶项下供试品提取溶 剂为甲醇，故以５０％甲醇、７０％甲醇和甲醇作为提 取溶剂进行考察。结果发现，以７０％甲醇为提取溶 剂时，各成分提取较为完全，故选用７０％甲醇作为 提取溶剂。选择超声时间为１０，２０，３０，４０ｍｉｎ对标 志性成分提取率进行考察，发现超声时间对桑叶物 质基准芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的提取率影响无差 别。为了节省时间，提高试验效率，故选择１０ ｍｉｎ 进行超声提取。 

３．２ 色谱条件的确定

 依据《中华人民共和国药典》２０１５年版桑叶项 下含量测定色谱条件，采用甲醇－０．５％磷酸梯度洗 脱，发现芦丁与异槲皮苷的色谱峰完全重合，二者极 性相近不易达到分离。经过对色谱柱、流动相比例 等进行研究，最终发现流动相为乙腈－０．５％磷酸，采 用梯度洗脱时，二者的分离效果良好，且紫云英苷与 相邻色谱峰也达到完全分离。依此确定了３种指标 成分同时定量的液相色谱方法，并且在此流动相基 础上确定了 ＵＰＬＣ特征图谱的色谱条件。

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