6种医院制剂微生物限度检查方法适用性试验研究

微生物限度检查是保证药品安全性的重要环 节，采用通过方法适用性试验的检查方法是获得可 靠结果的基本保证。复方氯霉素搽剂、复 方 苯 甲 酸搽剂、水杨酸搽剂、复方呋喃西林滴鼻液、苯酚甘 油滴耳液和硼酸滴耳液均是医院制剂中常见的外用 给药制剂，６种 制 剂 均 有 不 同 程 度 的 抑 菌 性。中 国药 典２０１５年 版 规 定，应先消除供试品的抑菌活 性，再依法进行检查。

１ 仪器与试剂

１．１ 仪器

ＡＥ２４０ 精 密 电 子 天 平 （瑞 士 ＭＥＴＴＬＥＲ 公 司）；ＨＷＳ２４型电热恒温水浴锅、ＤＨＧ－９１４５Ａ 电热 恒温鼓风干燥箱、GHP-9160隔水式恒温培养箱（上海一恒科技有限公司）；ＹＰ３００１ＮＤ电子天平（上海 精科有限 公 司）；ＭＪＰＳ－１５０型 霉 菌 培 养 箱（上 海 精宏实验设备有限公司）；ＷＪ－６无菌检查仪（天津市 罗根科技 有 限 公 司）；ＳＷ－ＣＪ－１Ｂ 净 化 工 作 台（苏 州 太仓净 化 设 备 厂）；ＬＤＺＸ－４０ＫＢＳ立 式 压 力 蒸 汽 灭 菌器（上海申安医疗器械厂）。

１．２ 试药

复 方 氯 霉 素 搽 剂 （批 号：１８０５２８、１８０７２７、 １８１１１４）、复方苯甲酸搽剂 （批 号：１８０３１４、１８０６１５、 １８０９２５）、水 杨 酸 搽 剂 （批 号：１８０５２４、１８０７０６、 １８０８２１）、复 方 呋 喃 西 林 滴 鼻 液 （批 号：１８０３２０、 １８０７１８、１８０９０５）、苯酚甘油滴耳液 （批 号：１８０５０９、 １８０７１１、１８１１０５）和 硼 酸 滴 耳 液 （批 号：１８０６２２、 １８０７２６、１８１２１３），均由联勤保障部队９００医院制备。

１．３ 培养基、稀释液和冲洗液

培 养 基：胰 酪 大 豆 胨 液 体 培 养 基 （批 号： １６１２０７１）、胰酪大豆胨琼脂培养基（批号：１６１０２５２）、 沙氏葡萄糖琼脂培养基（批号：１６０９２１４）、沙氏葡萄 糖液体培养基（批号：１６１１１６２）、甘露醇氯化钠琼脂 培养基（批号：１７０３２０２）、溴化十六烷基三甲胺琼脂 培养 基（批 号：１６０３０９）、麦 康 凯 液 体 培 养 基（批 号： １７０３２０）、麦康凯琼脂培养基（批号：１６０８２６）；稀释液 及冲洗液：ｐＨ ７．０ 无 菌 氯 化 钠－蛋 白 胨 缓 冲 液 （批 号：１７０９０６２）。均购自北京三药科技开发公司。

１．４ 菌株

金 黄 色 葡 萄 球 菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ） ［ＣＭＣＣ（Ｂ）２６００３］、枯 草 芽 孢 杆 菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉ－ ｌｉｓ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）６３５０１］、铜 绿 假 单 胞 菌 （Ｐｓｅｕｄｏ－ ｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）１０１０４］、白 色 念 珠 菌 （Ｃａｎｄｉｄａａｌｂｉｃａｎｓ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００１］、黑 曲 霉 （Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）［ＣＭＣＣ（Ｆ）９８００３］，大 肠 埃 希 菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）［ＣＭＣＣ（Ｂ）４４１０２］以上菌株均 为第３代，均购自福建省药检所。

１．５ 微生物限度标准

复方氯霉素搽剂、复方苯甲酸搽剂和水杨酸搽 剂为皮肤给药制剂；酚甘油滴耳液和硼酸滴耳液为 耳用制剂；复方呋喃西林滴鼻液为鼻用制剂。皮肤 给药制剂和耳用制剂的微生物限度标准如下：需氧 菌总数不超过１００ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ 可接受的最 大菌数 为２００），霉 菌 和 酵 母 菌 总 数 不 超 过１０ｃｆｕ／ ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌数为２０），不得检出 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌（１ｍｌ）。鼻 用 制 剂的微生物限 度 标 准 如 下：需 氧 菌 总 数 不 超 过１００ ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌数为２００），霉菌 和酵母菌总数不超过１０ｃｆｕ／ｍｌ（１ｍｌ或１ｇ可接受的最大菌数为２０），不得检出大肠埃希菌、金黄色葡 萄球菌、铜绿假单胞菌（１ｍｌ）。

２ 方法与结果

取经（３０～３５）℃培 养１８～２４ｈ的 金 黄 色 葡 萄 球菌、枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌的胰酪大豆胨 液体培养物和经（２０～２５）℃培养２４～４８ｈ的 白 色 念珠菌 沙 氏 葡 萄 糖 液 体 培 养 物 １ ｍｌ，加 ９ ｍｌｐＨ ７．０的氯化钠－蛋白胨缓冲液，１０倍递增 稀 释，制 成 适宜浓度的菌悬液。 取经（２０～２５）℃培养７ｄ的黑曲霉沙氏葡萄糖 琼脂斜面培养物，加５ｍｌ含０．０５％（ｍｌ／ｍｌ）聚山梨 酯８０的ｐＨ７．０的氯化钠－蛋白胨缓冲液，将孢子洗 脱，并将孢子过滤至无菌试管内，取孢 子 液１ｍｌ用 含０．０５％（ｍｌ／ｍｌ）聚 山 梨 酯８０的 ｐＨ７．０氯 化 钠－ 蛋白胨缓冲 液１０ 倍 递 增 稀 释，制 成 适 宜 浓 度 的 菌 悬液。６种样品分别在供试液制备环节和供试液经过处理后（薄膜过滤法最后一次冲洗液中）加菌，进行 回收比值的测定，结果见表１。加菌方式栏中 Ａ 代 表在供试液制备环节加菌可使各试验菌种的回收比 值均在０．５～２范围内，Ｂ代表在供试液经过处理后 加菌可使各试验菌种的回收比值均在０．５～２范围 内。除了复方苯甲酸搽剂，其余５种样品运用同一 种方法在两种加菌环节进行测定，试验菌种的回收 比值均在０．５～２范围内，加菌顺序对结果不会产生 影响。复方苯甲酸搽剂经薄膜过滤法处理后，在最 后一次冲洗液中加菌，微生物计数方法为１∶１０供 试液（每膜１０ｍｌ），冲洗量每膜７００ｍｌ，将加菌顺序 前移至供试液制备环节，需增加供试液的稀释倍数， 微生物计数方 法 为１∶２０供 试 液（每 膜１０ｍｌ），冲 洗量每膜３００ｍｌ。结果表明，虽然６种样品都有一 定的抑菌作用，但是加菌顺序对６种样品的影响不 大，最终均选择更为科学合理的加菌方式———供 试 液制备环节加菌。

３ 讨论

医院制剂是医院临床用药不可或缺的部分，由 于医院制剂主要在本院临床中使用，生产规模一般 不大，设备相 对 简 单，制剂质量易存在不稳定的风 险，因此需严格按照２０１５版《中国药典》的规定，进 行微生物限度检查方法适用性试验，保证制剂质量 的安全可控。２０１５版《中国药典》微生物限度检 查方法适用性试验与 ＵＳＰ等国际方案趋向一致，更 为科学有效。



 

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