化瘀骨合片提取工艺优化-一恒DZF-6050使用

股骨头坏死是骨科领域常见的难治性疾病，有 “轻则 残疾，重则瘫痪”的说法，近年来随着人们生活方式的 改变、交通事故的增加、激素的滥用，其发病率逐年上升， 严重影响 患 者 生 活。中医将股骨头坏死归属为 “骨 蚀” “骨疹”“骨痹”的范畴，大多采用补肾、健骨、活血、行 气、疏经等方法进行治疗。

1 材料 

1. 1 仪器 

JJ500 型电子天平 ( 常熟市双杰测试仪器厂) ; JP-300A 型高速多功能粉碎机 ( 永康市久品工贸有限公 司) ; DC-NSG-30 型多功能提取罐 ( 上海达程实验设备有 限公司) ; 旋转蒸发仪 ( 德国 Heidolph 公司) ; DZF-6050 型 真空干燥箱 ( 上海一恒科技有限公司) ; JJ3000 型动物电 子秤 ( 香港 G＆G 有限公司) ; BS224S 型电子天平 ( 万分之 一，德国 Sartorius 公司) ; 3K30 型离心机 ( 美国 Sigma 公司) ; 全自动血液流变仪 ( 北京普利生仪器有限公司) 。

1. 2 试药

必理通 ( 中美天津史克制药有限公司，国药准 字 H12021118，0. 5 g /片) ; 通络生骨胶囊 ( 浙江海正药业 股份有限公司，国药准字 Z20040001) ; 盐酸肾上腺素注射 液 ( 广州白云山明兴制药有限公司，批号 101001) 。内毒 素 ( LPS) ( 美国 Sigma 公司，批号 L2880) ; 甲强龙 ( MP) ( 比 利 时 辉 瑞 公 司，批 号 M96447 ) ; 注 射 用 青 霉 素 钠 ( 80 万单位，西南药业股份有限公司，批号 170309) 。

1. 3 动物

SPF 级 NIH 小鼠，雌雄各半，体质量 18～ 22 g， 由广 东 省 医 学 实 验 动 物 中 心 提 供， 合 格 证 号 44007200027585; SPF 级 SD 大鼠，雌雄各半，体质量180～ 220 g，由广东省医学实验动物中 心提供，合 格 证 号 4400720029427 ( 血瘀模型) 、44007200035572 ( 激素性股 骨头 坏 死 模 型) 。实验动物生产 许可证号 SCXK ( 粤) 2013-0002，饲养于广东省中医药工程技术研究院 SPF 级动 物实验室，设施使用许可证号 SYXK ( 粤) 2015-0059。

2 方法

2. 1 制备方法

2. 1. 1 样品一

按处方比例称取 6 036 g 饮片，取 152 g 白 芍粉碎成细粉，柳豆叶加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水 提取 1. 5 h，第 2 次加 12 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液， 滤过，滤液浓缩成稠膏 1; 取川芎、当归一起加 6 倍量水 浸泡 1 h 后提取 6 h，收集挥发油，药渣与剩余白芍及其余 饮片加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水提取 1. 5 h，第 2次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，滤过，滤液浓缩 成 1 g 稠膏相当于 1～ 1. 5 g 饮片的清膏，加入乙醇充分搅拌 以使含醇量达 65%，静置 24 h，滤过，滤液回收乙醇，浓 缩成稠膏 2。合并稠膏 1、2，加入白芍细粉混匀，干燥， 粉碎，再加入挥发油混匀，制成 1 g 干浸膏含 5. 08 g 饮片。

2. 1. 2 样品二

按处方比例称取 6 036 g 饮片，川芎、当 归一起加 6 倍量水浸泡 1 h 后提取 6 h，收集挥发油，药 渣、熟地黄加水煎煮 2 次，第 1 次加 12 倍量水提取 1. 5 h， 第 2 次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，滤过，滤液 浓缩成稠膏 1; 柳豆叶、白芍等其余饮片加水煎煮 2 次， 第 1 次加 15 倍量水提取 1. 5 h，第 2 次加 10 倍量水提取 1 h，合并 2 次煎液，滤过，滤液浓缩成 1 g 稠膏相当于 1～ 1. 5 g 饮片的清膏，加入乙醇充分搅拌以使含醇量达 65%， 静置24 h，滤过，滤液回收乙醇，浓缩成稠膏 2。合并稠膏 1、2，混匀，干燥，粉碎，再加入挥发油混匀，制成 1 g 干浸膏含 4. 17 g 饮片。

3 结果

正常组大鼠股骨头组织外膜完整，骨小梁 紧密排列，没有出现断裂损伤，其小梁上无空骨陷窝; 模型组大鼠股骨头组织外膜出现破裂，不完整，骨小梁破坏 程度大，呈现断裂不规则现象，其上方有明显空骨陷窝。

4 讨论

化瘀骨合方原为临床汤剂，前期将其制成胶囊剂，但 由于提取物引湿性较强，内容物易出现结块; 片剂具有剂 量准确，质量稳定，服用、携带、储存方便，机械化生产， 产量大，成本低等优点，故本实验拟将其开发成该剂型。 研究表明，柳豆叶中黄酮类成分具有加快成骨转化作 用，木豆素具有镇痛、抗炎、抗渗出等作用; 白芍中芍 药苷具有改善血液流变学、抑制血小板凝集等作用; 川 芎、当归挥发油具有抗炎镇痛作用，阿魏酸、川芎嗪具有 抑制血小板聚集、改善骨髓微环境等作用; 熟地黄中 毛蕊花糖苷能明显抑制破骨细胞的分化和形成，多糖可增 强人体的造血、免疫功能，由此可知，与化瘀骨合方 功能主治及药理作用相关的有效物质主要为挥发性成分及 芪类、黄酮类、苷类、多糖类、有机酸类等水溶性成分。 本实验在原胶囊剂工艺 ( 工艺一) 的基础上根据上述成分 性质，采用水作为提取溶剂，同时为了保证制剂成型，研 究挥发油、多糖对本方功效作用的贡献程度，又设计了分 别保留挥发油或多糖的提取工艺，通过药效实验进行优化， 其中工艺二保留挥发油、多糖成分，工艺三保留多糖而不 保留挥发油，工艺四保留挥发油而不保留多糖。

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