碘甘油微生物限度分析-一恒LRH-50F使用

1 仪器与材料 

1．1 仪器 

HFsafe － 1800TE Ⅱ型 B2 生物安全柜( 上海力申科 学仪器有限公司) ; LDZX － 80KCS 型压力蒸汽灭菌器， LDZX － 30KCS 型压力蒸汽灭菌器，均购自上海申安医 疗器械厂; BSD － TX345 型台式恒温振荡器( 上海博讯 实业有限公司) ; XY500JC 型电子天平( 常州市幸运电子 设备有限公司) ; HH － 系列电热恒温水浴锅( 北京科伟永 兴仪器有限公司) ; MJ 250FI 型霉菌培养箱，LRH － 250F 型生化培养箱，均购自上海一恒科学仪器有限公司; VORTEX － 5 型涡旋混合器( 海门市其林贝尔仪器制造 有限公司) ; Midi Plus 移液器( 德国赛多利斯公司) ; FC752 型薄膜过滤器( 杭州泰林生物技术设备有限公司) 。 

1．2 试药 

碘甘油( 规格为 1% ，每瓶 20 mL，批号为 170302， 某制药公司) ; 氯化钠( 天津市百世化工有限公司，批号 为 20150309) 。 

1．3 菌种 

铜 绿 假 单 胞 菌 Pseudomonas aeruginosa〔CMCC( B) 10104〕，金 黄 色 葡 萄 球 菌 Staphylococcus aureus 〔CMCC ( B) 26003〕，枯 草 芽 孢 杆 菌 Bacillus subtilis 〔CMCC( B) 63501〕，白 色 念 珠 菌 Candida albicans 〔CMCC( F) 98001〕，黑曲霉 Aspergillus nige〔r CMCC( F) 98003〕，大肠 埃希菌 Escherichia col〔i CMCC( B) 44102〕，均由中国食 品药品检定研究院提供，工作用菌株为第 3 代。

1．4 培养基及试剂 

胰酪大豆胨琼脂培养基( 批号为 1702042) ，胰酪大 豆胨液体培养基( 批号为 1703102) ，沙氏葡萄糖琼脂培 养基( 批号为 1704064) ，沙氏葡萄糖液体培养基( 批号 为 150914) ，pH 7． 0 氯 化 钠 蛋 白 胨 缓 冲 液 ( 批 号 为 1702242) ，蛋白胨培养基( 批号为 170208) ，麦康凯琼脂 培养基( 批号为 161213) ，甘露醇氯化钠琼脂培养基( 批 号为 160112) ，麦康凯液体培养基( 批号为 1612222) ，溴 化十六烷基三甲铵琼脂培养基( 批号为 170103) ，均由 北京三药科技开发公司提供，培养基适用性检查均符合 2015 年版《中国药典》要求。 

2 方法与结果 

2．1 菌液制备 

在生物安全柜中操作，将铜绿假单胞菌、金黄色葡 萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌置 50 mL 胰酪大豆 胨液体培养基中，于 30 ～ 35 ℃培养箱中培养 18 ～ 24 h; 将白色念珠菌接种至 50 mL 沙氏葡萄糖液体培养基中， 于 20 ～ 25℃ 培养箱中培养 2 ～ 3 d; 上述新鲜培养物用 无菌 0． 9% 氯化钠溶液稀释成适宜浓度的菌悬液，等待 接种。将黑曲霉接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基斜面上， 于 20 ～ 25 ℃培养箱中培养 7 d 或直至产生丰富的孢子， 加入少量含 0． 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的无菌 0． 9% 氯 化钠溶液，洗脱孢子，也可借助无菌长柄棉签轻轻擦 拭孢子，收集孢子悬液; 用含 0． 05% ( L / L) 聚山梨酯 80 的无菌 0． 9% 氯化钠溶液将黑曲霉稀释成适宜浓度 的孢子悬液，等待接种。 

2．2 供试液制备 

取供试品 10 mL，加入 pH 7． 0 氯化钠蛋白胨缓冲 液至 100 mL，45 ℃ 恒温振荡 15 min，制成 1 ∶ 10 的供试 液 A。取 1 ∶ 10 供试液 A 20 mL，加入 80 mL pH 7． 0 氯化 钠蛋白胨缓冲液，混匀，制成 1 ∶ 50 的供试液 B。 

2．3 微生物计数方法适用性试验 

1) 平皿法。试验组: 取 2． 2 项下供试液 A，B 分别置 5 个无菌试管中，每管装量 9． 9 mL，再分别加入 2． 1 项 下稀释好的含菌量为 103 ～ 104 cfu / mL 的铜绿假单胞 菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲 霉试验菌液 0． 1 mL; 供试品对照组: 取稀释好的供试液，以稀释液代替菌液，同试验组操作; 菌液对照组: 取 相应稀释液替代供试液，同试验组操作。

3 讨论 

碘甘油中的甘油在制剂中除了有助溶、矫味、增稠 多种作用外，还有抗菌防腐作用。碘除作治疗药和其他方 面的用途外，在碘甘油药剂中主要用作杀菌消毒剂和抑 菌防腐剂，所以碘甘油对铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球 菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉都有一定抑菌作 用。通过稀释法( 1 ∶ 50) 也不能完全消除对 5 种菌的 抑制，采用薄膜过滤法可高效地消除碘甘油的抑菌性。故 对于碘甘油的微生物限度检查，首先建立方法适用性试 验时应消除碘甘油中的抑菌作用，以免出现假阴性。消除制剂的抑菌性，一般的试验顺序是稀释法、含中和剂的 稀释法、薄膜过滤法、含中和剂的薄膜过滤法。

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