上海一恒分析A549 细胞的抑制作用

肺癌是目前发病率、死亡率增长最快的恶性肿 瘤，大多数情况下由于癌细胞高侵袭性，手术 无法达到预期效果，而化疗通常会产生严重的副作 用，并且近年来新型靶向药物价格昂贵，大大限制 了临床推广。前期报道［2-4］，中成药毒副反应少， 对中晚期肺癌患者具有提高机体免疫力、改善临床 症状等作用，正成为当前研究热点。

1 材料

1. 1 试药

艾叶产自河南驻马店，经河南中医药 大学董诚明教授鉴定为正品，其挥发油为实验室自 提。ＲPMI 1640 ( 北京索莱宝科技有限公司) ; 胎 牛血清、MTT ( 美国 Sigma 公司) ; AnnexinV-FITC 细胞凋亡检测试剂盒、细胞周期检测试剂盒 ( 江 苏凯基生物技术股份有限公司) ; 5-氟尿嘧啶注射 液 ( 上海旭东海普药业有限公司) 。

1. 2 仪器

IL-161CT CO2 培养箱 ［施都凯仪器设 备 ( 上海) 有限公司］; 168-1000XC 酶标仪 ( 美 国 Bio-Ｒad 公 司) ; XL-MCL 流 式 细 胞 仪 ( 美 国 Beckman Coulter 公司) 。

1. 3 动物

SPF 级 雌 性 BALB /c-nu 裸 鼠，周 龄 5～6周，体质量 18～ 20 g，由北京维通利华实验动 物技 术 有 限 公 司 提 供，合 格 证 号 SCXK ( 京) 2016-0006，在温 度 20 ～ 25 ℃、相 对 湿 度 40% ～ 60%的无菌笼中饲养，定期喂食。

2 方法

2. 1 挥发油提取

称取艾叶 500 g，粉碎后置于 10 000 mL 圆底烧瓶中，加入 5 000 mL 蒸馏水浸泡 过夜，水蒸气蒸馏法提取 6 h，收集挥发油，无水 硫酸钠除水后密封贮存于－20 ℃下，测得挥发油产 率为 0. 39%。

2. 2 细胞培养

A549 细胞贴壁生长，ＲPMI 1640、 胎牛血清以 9 ∶ 1 比例配制成完全培养基，置于 37 ℃、5% CO2 细胞培养箱(上海一恒MJ-70F-I霉菌培养箱)中培养，取对数生长期 细胞进行实验。

2. 3 供试品溶液制备

1 mL 挥 发 油 质 量 为 944 mg。体外药效实验中，取挥发油 16 μL，加入24 μL DMSO 混合均匀，培养基逐步稀释，即得 ( DMSO 最高含有量为 0. 1%) ; 体内药效实验中， 取挥发油 1 mL，加入 20 μL 吐温-80，混合均匀， 生理盐水逐步稀释，即得。

2. 4 挥发油对

A549 细胞增殖影响 胰酶消化处 于对数生长期的 A549 细胞，离心，调节细胞密度 至 5×104 ～6×104 /mL，按每孔 100 μL 接种于 96 孔 板中，37 ℃、5%CO2 培养箱中培养 24 h，吸去原 培 养 基， 加 入 188. 8、 283. 2、 377. 6、 472. 0、 566. 4、660. 8 μg /mL 挥 发 油，阳性对照组加入 10 μg /mL 5-氟尿嘧啶，阴性对照组加入 100 μL 空 白培养基，每个质量浓度 4 个复孔。于 24、48、 72 h 各加入 20 μL MTT 溶液，置于培养箱中孵育 4 h，吸去原培养基，加入 150 μL DMSO，微量振 荡器上振荡 10 min 后上机检测，计算细胞增殖抑 制率，增殖抑制率 = ( 1－给药孔吸光度/空白孔吸 光度) × 100%，重 复 3 次，SPSS 软 件 计 算 IC50值。

3 结果

图 1 显示，挥 发油对 A549 细胞增殖具有明显的抑制作用，并呈浓 度依赖性。当其质量浓度为 660. 8 μg /mL 时，48、 72 h 细胞生长抑制率均在 80%以上，24、48、72 h 的 IC50值分别为 513. 54、495. 60、484. 27 μg /mL。


4 讨论

肺癌具有恶化程度高、治疗效果差、早期症状 体征不典型等特点，化疗是最常用的方法，但其自 身毒副作用和耐药性又妨碍临床疗效，临床 常见的类型是非小细胞肺癌，其中肺腺癌所占比例 最大。A549 细胞属于人肺腺癌细胞系，细胞学水 平实验中常被作为标准模式细胞。



 

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