一恒分析皮肤主要构成细胞中的表达

皮肤是人 体 最 大 的 器 官，是人体最外层的屏障， 皮肤屏障功能 完 好 对 维 持 机 体 的 健 康 具 有 十 分 重 要 的作用。既往研究发现，核激素受体可调节细胞的增 殖、分化和凋亡，在 皮 肤 的 发 育 过 程 中 发 挥 着 重 要 的 作用。目前在皮肤科临床治疗中运用最多、研究最 深入的核激素受体是糖皮质激素受体、维甲酸受体和 维生素 Ｄ受体及其相关配体。随着 新 的 核 激 素 受 体 不断涌现，核激素受体家族成员与皮肤之间的相互作 用值得进一步探讨。

１ 材料与方法

１．１ 材料

人皮 肤 ＫＣ 和人 真 皮 ＦＢ 均购 自 美 国 组 织培养库（ＡＴＣＣ）。

１．２ 仪器与试剂

高级光学显微镜（日 本 Ｏｌｙｍｐｕｓ 公司），ＰＣＲ反应扩增仪（美国 Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司），荧光定 量ＰＣＲ系统（美国 ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司），微量紫 外分光 光 度 计（美 国 Ｔｈｅｒｍｏ公司）。细胞 培 养：ＫＣ 培养基，ＦＢ 培养 基，胰 蛋 白 酶 终 止 缓 冲 液（ＡＴＣＣ）， ＤＰＢＳ缓冲液（美国 Ｈｙｃｌｏｎｅ公司），青霉素－链霉素溶 液（美国Ｃｅｌｌｇｒｏ公司），胰蛋白酶（美国 Ｒｏｃｈｅ公司）。ＰＣＲａｒｒａｙ：ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉ试剂盒、ＲＴ２ＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄ试 剂盒、ＲＴ２ ＳＹＢＲ ＧｒｅｅｎＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ、ＲＴ２ Ｐｒｏｆｉ－ ｌｅｒＰＣＲａｒｒａｙｐｌａｔｅ（美国 Ｑｉａｇｅｎ公司）。

１．３ 方法

１．３．１ 细胞培养

３７ ℃、含５％ ＣＯ２ 的细胞培养箱(一恒MJ-150-I霉菌培养箱)中，用各自专用培养基对细胞进行培养。

１．３．２ 细胞 ＲＮＡ 的提取

分别提取培养好的 ＫＣ、 ＦＢ的 ＲＮＡ。分别 检 测 两 种 ＲＮＡ 标 本 的 纯 度 和 浓 度，每种细胞３个 复 孔。ＲＮＡ 提取过程中所使用的 容器和 移 液 吸 头 均 为 ＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅ配 置 并 严 格 按 照 ＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ说明书要求进行操作。

１．３．３ ＰＣＲａｒｒａｙ检测

按 ＲＴ２ ＰｒｏｆｉｌｅｒＰＣＲａｒｒａｙ ｐｌａｔｅ试剂盒的操作说明，配置对应的反应体系。扩增 条件为：９５ ℃预变性１０ｍｉｎ，９５℃１５ｓ，６０℃１ｍｉｎ， 共４５个循环。

１．４ 统计学处理

采用２－ΔΔＣｔ法对实验所得的计量 资料进行分析。采用 ＭｉｃｒｏｓｏｆｔＥｘｃｅｌ软件 对 不 同 组 别的数据进行归类整理后进行统计学分析。

２ 结 果

在 ＫＣ和 ＦＢ中，核激素受体有大量的表达。大部分核激素受体在人 ＫＣ中的表达水平比在ＦＢ 中高。除经典的 糖 皮 质 激 素 受 体（ＧＲ）以外，表 达 较 高的 核 激 素 受 体 主 要 集 中 在 ＲＸＲ 二 聚 体 家 族，如 ＶＤＲ、ＲＸＲｓ、ＰＰＡＲｓ、ＬＸＲβ 和 ＴＲｓ等，且部 分受体 如 ＶＤＲ、ＲＸＲｓ、ＰＰＡＲｓ的表 达 明 显 高 于 ＧＲ 的表达。此外，还有一些孤儿受体如 ＮＲ２Ｆ２、ＮＲ１Ｄ２、 ＮＲ２Ｃ１、ＮＲ２Ｃ２ 等的表达也很高。研究 也 发 现，在皮肤主要构成细胞中，存 在 ＲＸＲα、 ＲＸＲβ、ＲＡＲα 和 ＲＡＲγ 表达，但以 ＲＸＲα 和 ＲＡＲγ 表 达为主，是皮肤中的优势表达亚型。ＲＡＲ 和 ＲＸＲ 各 亚型之间具有各自特异性的配体，且和各配体的亲和 力不同。其作用的大小取决于受体的分布量，辅助因 子的性质和数 量 及 维 甲 酸 受 体 选 择 性 激 动 剂 和 拮 抗 剂的相互作用。部分患者使用维甲酸类药物时，皮 肤会出现红斑、脱 屑、干 燥、烧 灼 等 典 型 的 不 良 反 应， 这些皮 肤 刺 激 反 应 与 维 甲 酸 受 体 ＲＡＲα、ＲＡＲβ、 ＲＡＲγ 的高表达和被激活密切相关。表皮是脂质代谢活跃的部位，本研究发现在皮肤 主要构成细胞中，核激素受体 ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ 两种亚 型均有表达，其中 ＰＰＡＲδ 的表达水平最高，是优势表 达亚型。既 往 研 究 发 现，激 活 ＰＰＡＲｓ可诱 导 ＫＣ 分 化。受体激活可诱导表皮脂质合成，促进板层小体的 形成和分泌，增加角质层内脂质处理必需酶的活性， 诱导板层膜的形成，从而改善皮肤屏障功能。

３ 讨 论 　　

在调节皮肤细胞功能和动态平衡的过程中，核激 素受体发挥着十分重要的作用，其中糖皮质激素与细 胞中的 ＧＲ 结 合 以 后，在炎症性皮肤病中发挥着抗 炎、免疫抑制、抗细胞增殖等生物学作用。但由于 ＧＲ 靶向治疗的配体特异性较弱，长期系统使用会导致高 血压、骨质疏松 等 不 良 反 应；长 期 局 部 使 用 可 导 致 皮 肤萎缩、类 固 醇 性 痤 疮、毛细血管扩张等不良反应。 因此，在一定程度上限制了糖皮质激素的应用。目 前，寻找不良反应更小的靶向治疗配体或其他核激素 受体的靶向药物已经成为研究的热点。



 

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