浅谈抑制茶炭疽病病菌活的要素

茶炭疽病是我国茶园中常见的主要病害 之一，在高温高湿天气发病较重，在茶叶上可 形成大型斑块，并造成茶树大量落叶，该病可 使投产茶园秋茶减产 15%~30%，严重的达到 40%~50%，造成茶树产量与茶叶品质都下降。 茶树上登记防治茶炭疽病的杀菌剂有吡唑醚 菌酯、啶氧菌酯、多抗霉素和代森锌等， 施用化学农药是目前防治茶炭疽病的主要手 段。目前世界各茶叶进口国加强了茶叶农药最 大残留的限制，使得防治茶树病害的化学农药 不宜使用。随着我国化学农药减施增效战略实 施和茶叶产业的国际化、现代化、标准化的推 进，茶园减施，甚至不施化学农药也将成为必 然趋势。为了有效减少化学农药的使用，利用 植物体内的次生代谢物质对茶树病害进行防 控是有效的防治途径之一，其中利用芦柑皮、 艾蒿等提取物及山苍子等植物精油来抑制茶 炭疽病成为研究热点。

99%右旋香茅醇购于上海阿拉丁试剂有 限公司；97%左旋香茅醇[(-)-β-香茅醇]购于上 海萨恩化学技术有限公司；无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司），10%多抗霉素可湿 性粉剂购于山西奇星农药有限公司，吐温-80 （天津市大茂化学试剂厂）。超净工作台（苏 净集团安泰公司）；电热鼓风干燥箱（上海一 恒科技有限公司）；电子天平（型号： BSA224S-CW）；恒温培养箱（上海跃进医疗器械厂）；高温蒸汽灭菌锅（上海沉汇仪器有限公司）。 供试菌株：茶炭疽病菌（C. gloeosporioides）， 由贵州省茶叶研究所提供。

采用生长速率法。在药剂初筛的基础 上选出 5 个有效浓度梯度，配置成相应的 PDA 毒体培养基，用 5 mm 打孔器在活化好的茶炭 疽病培养皿沿菌丝边缘打孔，将菌饼放入到培 养皿中央，带菌丝面与 PDA 培养基面相接触， 以含 0.1%吐温-80 和 5%无水乙醇无菌水溶液 作对照，每个处理 4 次重复。茶炭疽病菌株由 贵州省茶叶研究所提供（已纯化）；将密封保 存在试管内的菌株用接种针挑取少量菌丝转 移到 PDA 培养基中，置于 25℃恒温培养箱内 培养 120 h，活化菌株，即可开展下一步试验。 置于 25℃恒温培养箱内培养 120 h，采用十字 交叉法测得菌丝体生长直径，计算对炭疽病病 菌生长的抑制率，求出毒力回归方程及抑制中 浓度（EC50）。生长抑制率公式： 生长抑制率=(∆D1－∆D2)/∆D1×100% ∆D1 为对照菌落直径与菌饼直径的差值， ∆D2 为处理菌落直径与菌饼直径的差值。

根据 Horsfall 方法设计混配比例。以右 旋香茅醇和左旋香茅醇两种单剂的有效中浓 度 EC50 为基础，配制两种单剂化合物的有效 中浓度药液，按体积比(9︰1)、(8︰2)、(7︰ 3)、(6︰4)、(5︰5)、(4︰6)、(3︰7)、(2︰8)、(1 ︰9)进行混合，分别测定每组混合处理 120 h 后 对茶炭疽病菌菌丝生长抑制率。根据体积比测度 的抑制率选出较好的体积比，先配制单剂浓度梯 度，再按相对应的浓度梯度顺序将两单剂按具有 增效作用组合的体积比混配，得到增效配比混剂 的浓度梯度。计算出各单剂和混剂处理后 120 h 的毒力回归方程及抑制中浓度（EC50）。

根据 Sun 等的方法求出共毒系数及增效倍数，共毒系数大于 120 表示具增效作用， 小于 80 表示拮抗作用，介于 80~120 之间表示 相加作用。以剂量对数值（x）为自变量，抑 制率（y）为因变量，采用 DPS 7.05 软件计算 毒力回归方程、抑制中浓度（EC50）、相关系 数。共毒系数的计算方法参照李建明等的方 法： 共毒系数（CTC）= 增效组合实际毒力指数 增效组合理论毒力指数。

采用菌丝生长速率法，测试了香茅醇及其 不同异构体（右旋、左旋香茅醇）和 10%多抗 霉素（对照药剂）对茶炭疽病菌的室内毒力。结果表明，经过处理后的 120 h，右旋香茅 醇和左旋香茅醇对茶炭疽病菌的菌丝生长抑制 中浓度 EC50 分别为 (113.27±0.95) mg·L-1 和 (119.87±0.20) mg·L-1 ，均低于香茅醇 [(144.12±0.42) mg·L-1]，而高于对照药剂 10% 多抗霉素可湿性粉剂[(105.06±0.32) mg·L-1]。根据单剂毒力测定结果，对右旋香茅醇和 左旋香茅醇进行混配增效配比的定性筛选。结 果表明（表 2），处理后 120 h，右旋香茅醇 和左旋香茅醇的 EC50 体积配比为(6︰4)、(5 ︰5)、(4︰6)、(3︰7)和(2︰8)时，对菌丝生长 的校正毒力比均大于 1，表现为增效作用；配 比为 1︰9 时，校正毒力比明显小于 1，表现 出拮抗作用；其他配比的校正毒力比为 1 左右， 表现出相加作用。采用共毒系数法，对右旋 香茅醇和左旋香茅醇进行混配增效配比的定 量筛选。由表 3 可见，处理后 120 h，右旋香 茅醇和左旋香茅醇的五组质量比中，配比为 (1∶1.4)、(1︰3.8)、(1.6︰1)时，EC50 值分别 为(98.05±9.02) mg·L-1、(95.72±9.40) mg·L-1 和 (89.54±8.21) mg·L-1，共毒系数分别为 120.57、121.42 和 130.19，均大于 120，表现为增效作 用，分别增效 20.57%、21.42%和 30.19%；另 外两个配比的共毒系数均介于 111~120 之间， 表现为相加作用。通过两异构体不同质量配比 后能有效提升对茶炭疽病的毒力，EC50 值除 配比为 1∶1 配比外均低于对照药剂（10%多 抗霉素可湿性粉剂）。

香茅醇及其异构体（右旋香茅醇和左旋香 茅醇）对茶炭疽病（C. gloeosporioides）有着较 好的抑菌效果，EC50 值均在 150 mg·L-1 以下， 与 Nidiry 等的研究结果基本一致。香茅醇 属于单萜类化合物，Knobloch 等报道精油 成分在水中的溶解度直接关系到它们穿透细菌或真菌细胞壁的能力，决定抑菌活性的大小， 根据这个理论，在今后实际加工使用中，可将其 加工成水性化剂型，如微乳剂、水乳剂等，以提 高亲水性和抑菌活性。



 

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