分析大肠埃希菌的表型特征探讨

致泻性大 肠 埃 希 菌 包 括 产 志 贺 毒 素 大 肠 埃 希 菌 （ＳＴＥＣ），侵 袭 性 大 肠 埃 希 菌（ＥＩＥＣ），产 肠 毒 素 大 肠 埃希菌（ＥＴＥＣ），肠致病性大肠埃希菌（ＥＰＥＣ）和肠聚 集性大肠埃 希 菌（ＥＡＥＣ）。其 中，ＳＴＥＣ 能 导 致 血 性 腹泻、出血性肠 炎，甚 至 严 重 的 溶 血 性 尿 毒 症 综 合 征 （ＨＵＳ），国 内 外 已 有 报 道。

哥伦比亚血平板、麦康凯平板、山梨 醇麦康凯平板购自广州市迪景微生物科技有限公司， 大肠埃希菌 Ｏ１５７显色平板购自法国科玛嘉公司。诊 断血清：大肠埃希菌诊断血清购自丹麦国家血清研究 院。ＯＫ Ｏ Ｐｏｏｌ１ 血 清 （内 含 Ｏ１５７ 血 清 型）批 号： Ｐ１Ｑ１－２Ｈ１，有效期２０２１－０７－３０；Ｏ１５７单价血清批号： Ｏ１５７Ｋ１－１Ｈ２，效 期 ２０２０－０１－０３；Ｈ７ 单 价 血 清 批 号：Ｈ７Ｅ１－Ｈ１５，效期至２０２１－０６－０６，均在有效期内。

ＭＵＧ 和山梨醇生 化 管 购 自 杭 州 滨 河微生物试剂有限公司，均在有效期内。

大 肠 埃 希 菌 Ｏ１５７：Ｈ７（ＡＴＣＣ ４３８８８）、大肠 埃 希 菌 Ｏ１５７：Ｈ７（ＮＣＴＣ１２９００）、大 肠 埃希菌 Ｏ１５７：Ｈ７（卫生部室间质评菌株１７０８）３株标 准菌株 以 及 大 肠 埃 希 菌 ＡＴＣＣ２５９２２、ＥＩＥＣ Ｏ１４３、 ＥＴＥＣ、ＥＰＥＣＯ１１１、ＥＡＥＣ 各１株，均为本室 收 藏 质 控菌株。

２０１８年４月至２０１９年２月广州 市花都区餐饮从业人员粪便（肛 拭 子）中 随 机 检 出 的 大肠埃希菌３５７株。

ＡＴＢ 半 自 动 微 生 物 仪 及３２Ｅ 鉴 定条和吲哚试剂、ＶＩＴＥＫ２－ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生物仪 及革兰阴性菌鉴定卡（ＧＮ 卡），法国生物梅里埃公司 生产，鉴定条、鉴定卡及试剂均在有效期内。基 质 辅 助激光解 吸－飞 行 时 间 质 谱 仪（ＶＩＴＥＫ ＭＳ），法 国 梅 里埃公司生 产。DHP-9052电热恒温培养箱，上 海 一 恒科学仪器有限公司生产。ＺＦ－８０型暗箱四用紫外线 分析仪，上海嘉鹏科技有限公司生产。

通过实验菌株的菌落特征、ＭＵＧ 和山梨 醇发酵试验结果以及自动化仪器鉴定、血清学试验鉴定大肠埃希菌 Ｏ１５７：Ｈ７，找出该菌的鉴定特征。用哥 伦比 亚 血 平 板 复 苏 大 肠 埃 希 菌 Ｏ１５７：Ｈ７、ＡＴＣＣ ２５９２２、ＥＩＥＣ Ｏ１４３、ＥＴＥＣ、ＥＰＥＣ Ｏ１１１、ＥＡＥＣ 六 种 菌，同时 接 种 ＭＵＧ 和山梨醇生化管，并 划 线 接 种 麦 康凯平板、山梨醇麦康凯平板、大肠埃希菌 Ｏ１５７显色 平板观察菌落特征，并做玻片法血清学凝集试验。健 康体检人员的粪便拭子划线接种山梨醇麦康凯平板， ３５℃孵育１８～２４ｈ，挑选无色透明（山梨醇阴性）、红 色（山梨醇阳性）菌落转种哥伦比亚血平板经３５ ℃孵 育１８～２４ｈ，取 革 兰 阴 性、氧化酶阴性的培养物，用 ＡＴＢ进行生化鉴定，鉴定出的大肠埃希菌（选择好的 或者极好的 鉴 定 菌 株）接 种 ＭＵＧ 和山梨醇生化管。 对 ＭＵＧ 阴性或 山 梨 醇 阴 性 以 及２项试验均阴性的 大肠埃希菌划 线 接 种 麦 康 凯 平 板、大 肠 埃 希 菌 Ｏ１５７ 显色平板，观察菌落特征并做玻片法血清凝集试验。

质控菌 株 的 ＭＵＧ 和山梨醇以及血清学试验质 量控制合格，３株大肠埃希菌 Ｏ１５７：Ｈ７的 ＭＵＧ 和山 梨醇均阴性、与 大 肠 埃 希 菌 Ｏ１５７多 价、Ｏ１５７单 价 及Ｈ７单 价 血 清 凝 集。其他的大肠埃希 菌结果明确。 ＭＵＧ 和山梨醇试验及大肠埃希菌 Ｏ１５７：Ｈ７血 清 学 试验的质量 控 制 结 果 如 下。ＭＵＧ（＋）山 梨 醇（＋）： 大肠埃 希 菌 ＡＴＣＣ２５９２２；ＭＵＧ（－）山 梨 醇（－）为 Ｏ１５７：Ｈ７ ＡＴＣＣ ４３８８８、Ｏ１５７：Ｈ７ ＮＣＴＣ １２９００、 Ｏ１５７：Ｈ７卫生部质评菌１８０７；Ｏ１５７：Ｈ７血清学（＋） 为 Ｏ１５７：Ｈ７ＡＴＣＣ４３８８８、Ｏ１５７：Ｈ７ＮＣＴＣ１２９００、 Ｏ１５７：Ｈ７卫生部质评菌１８０７；Ｏ１５７：Ｈ７血清学（－） 为大肠埃希菌 ＡＴＣＣ２５９２２。　三株大肠埃希菌 Ｏ１５７：Ｈ７的 ＭＵＧ 和山梨醇试 验均阴性；ＥＰＥＣＯ１１１的 ＭＵＧ 阳性，山梨醇阴性；其 他的菌株２项试验均阳性，见图２，图３；山 梨 醇 试 验结果与山梨醇麦康凯平板菌落特征吻合。

大 肠 埃 希 菌 Ｏ１５７：Ｈ７的 ＭＵＧ 阴 性，山梨醇阴性，有两个血清型，８５％为 Ｏ１５７：Ｈ７（有动 力）， １２％为 Ｏ１５７：ＨＮＭ（无 动 力），３％ 是 Ｈ７ 以 外 的 Ｈ 型。由于临床微生物室通常不将其作为目的菌，且此 菌在麦康凯平板上是红色菌落，可能作为非致病菌排 除。 来自粪便中的３５７株大肠埃希菌，未检出 Ｏ１５７： Ｈ７，可 能 与 健 康 人 群 带 菌 率 低 有 关。 虽 然，根 据 ＭＵＧ 或山梨醇 单 一 试 验 可 以 筛 查 Ｏ１５７，但 有 较 高的假阳性，因 ＭＵＧ 和山梨醇均阴性的大肠埃希菌 只有２．２％，故选择“双阴”菌株作进一步鉴定，特别在 大批量标本筛查时省时省力、且节省血清。



 

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