目前临床应用或实验室研究所用的美洲大蠊虫体多为传统工艺沸水或乙醇烫杀,而美洲大蠊中蛋白质类物质占主要成分,研究证明也为有效物质,蛋白质受热易分解、变性,可能会影响药效。 采用美洲大蠊活体进行实验,是本实验的特色,相对于购买的干燥虫体,用美洲大蠊新鲜虫体可以较大程度地保
留虫体中的各种有效物质,避免虫体在储存过程中因环境或时间等因素导致虫体发霉或产生其他变化。 本文以得率、含水量、醇浸出物含量及蛋白质含量为理化指标,以体外抗肿瘤实验为活性指标,研究传统干燥、真空干燥、冷冻干燥对蛋白质含量及体外抗肿瘤细胞增殖的影响。
实验室仪器
HWS-24型电热
恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司),DZF-6050MBE 型真空干燥机(上海博讯实业有限公司医疗设备厂),FXB101-0 型电热鼓风干燥箱(上海树立仪器仪表有限公司),FA2004电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司),UV-6000 型紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司),HNY- 恒温培养振荡器(天津市欧诺仪器仪表有限公司),TDD5M 型医用离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司),HFsafe-1200TE 型生物安全柜(上海力申科学仪器有限公司),HF90 型二氧化碳培养箱(上海力申科学仪器有限公司)。
由实验可知,真空制的含水量最高,为 3.473%,可能因其在干燥过程中一直处于封闭环境中,故美洲大蠊虫体中的水分无法完全排到外界,以致部分水分残留在虫体中;烘干制因使用了鼓风机,便于仪器内部与外界的空气流通,故美洲大蠊虫体中水分含量有所降低;冷冻干燥可使美洲大蠊中的水分瞬间升
华,故明显降低虫体的含水量。
讨论
目前,对于美洲大蠊的前处理工艺,已有初步的研究,低温炮制美洲大蠊已成为研究人员的共识。本实验采用先冻杀美洲大蠊,再对其进行冷冻干燥和真空干燥两种方式的比较,最大程度地减少温度对虫体的影响。 由实验结果可知,冻干的美洲大蠊蛋白质含量高于传统制美洲大蠊,可能与低温能较好保留美洲大蠊中蛋白质类物质的完整性有关,而传统制美洲大蠊在烫杀的过程中温度过高,可导致其蛋白质类成分瞬间变性,故检测量较低;真空制的美洲大蠊在等质量的情况下,蛋白质含量最高,可能由于减压干燥过程是在 35 ℃环境下进行,部分蛋白质能够在其酶的作用下分解,产生更多的短肽或者氨基酸,因而使蛋白质含量增加。本实验采用考马斯亮蓝法对前处理工艺进行了方法学考察,结果表明该处理方法具有一定的可行性,符合样品分析方法的要求,但也存在不足,比如未考察其他蛋白质含量测定方法对美洲大蠊中蛋白质含量的影响,故不能确定该法是测定美洲大蠊中蛋白质含量的最有效方法,因而下一步实验可增加不同蛋白质含量测定方法对美洲大蠊中蛋白质含量的影响,优选出最佳测定方法。