小鼠实验性脑水肿的影响分析-一恒干燥箱使用

脑水肿是液体在脑细胞内及细胞外间隙的病理 性聚积，通常不是单一原因引起的，多见于颅脑损 伤、肿瘤、炎症及脑血管疾病等的继发改变，也可继 发于全身疾病。脑水肿既是脑梗死发展到一定阶段 出现的病理生理改变，同时也是疾病早期致死的主要原因，亦对脑梗死的发生发展起着重要的促进作 用。因此，如何使脑水肿迅速消退、降低颅内压成为 急性脑损伤的主要治疗目标。

材料与方法

1 药物与试剂

注射用曲札茋苷( 昆药集团股份有限公司药物研究院，批号: 170101，规格: 每支 20 mg) ; 依达拉奉 注射液( 昆明积大制药股份有限公司，批号: 170406) ; 甘露醇注射液( 上海百特医疗用品有限公司，批号: S1704007) ; 丁苯酞氯化钠注射液( 石药集团恩必普药业有限公司，批号: 20170109) ; 水合氯醛( 山东西亚化学工业有限公司，批号: 119957，Cas 号: 302-17-0) ; 脂 多糖( LPS，Sigma 公司，批号: Exp2019 /04) ; 氯化钠注 射液( 科伦药业浙江国镜药业有限公司，批 号: A160301D1) 。

2 仪器

AＲ224 电子天平［奥豪斯仪器( 上海) 有限公 司，称量试药及脑重］; BL 2000 电子天平( 厦门拜伦斯电子科技有限公司，称量动物) ; HG 9245A 电 热恒温鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) ; 量瓶、剪刀、弯镊、止血钳、动脉夹、秒表( 国产) ; 直 径 0． 128 mm 尼龙线( 日本) 。

3 动物

SPF 级 ICＲ 小鼠，雄性，5 ～ 7 周龄，体重 20 ～ 30 g， 昆药集团股份有限公司实验动物室，生产许可证: SCXK( 滇) K2014-0001; 饲养于 IVC 动物实验室，温 度 20 ～ 26 ℃，湿度 40% ～ 70% ，照明 12 h∶ 12 h 明暗 交替，照度 150 ～ 300 lx，噪音≤60 dB，实验动物使用 许可证: SYXK( 滇) K2014-0001，发证单位: 昆明市 科学技术局。

4 对局灶永久性脑缺血小鼠脑含水量的影响

参考 Huang 等的线栓法，选择 26 ～ 30 g 雄性 ICＲ 小鼠，以 4% 的水合氯醛腹腔注射 ( ip) 麻 醉 ( 400 mg·kg － 1·BW) 后，切开右侧颈部皮肤，分离、结 扎右侧颈总动脉近心端及颈外动脉，在颈总动脉分 叉处的近端 2 ～ 3 mm 处切口，插入直径为 0． 125 mm 的尼龙线 8 ～ 10 mm，线栓进入颈内动脉( internal carotid artery，ICA) 、穿过大脑中动脉( middle cerebral artery，MCA) 起始端至大脑前动脉近端，阻断 MCA 的所有血流来源，结扎备线并缝合皮肤。假手术组 除不插线外，其余均同模型组。模型动物循环分为 8 组: 假手术组、模型对照组、阳性对照依达拉奉 10 mg·kg － 1组、丁苯酞组 8. 3 mg·kg － 1 组、甘露醇 2. 0g·kg － 1组以及曲札茋苷高、中、低剂量( 16，8 和 4 mg·kg － 1 ) 组。于造 模 后 1 h，各组动物分别按 20 mL·kg － 1体重尾静脉注射( iv) 给药，模型组和假手术 组给予等体积氯化钠注射液。保证每组纳入合格动 物数为 14 只。给药后 24 h，每组 1 ～ 11 号动物取脑 称重，并于 80 ℃干燥恒重，按干湿质量法计算脑含 水率。每组 12 ～ 14 号动物快速取脑，置于 10% 甲醛 溶液中固定后进行组织病理学检查。为减小实验的 系统误差，造模、分组、给药、取脑及称量均平行操作。 脑含水率 = ( 湿脑重 － 干脑恒重) /脑湿 重 × 100% 式( 1) 抑制率 = ( 模型组脑含水量 － 样品组脑含水 量) / 模型组脑含水量 × 100% 式( 2)

5 对全脑缺血/再灌注小鼠脑含水量的影响

并加以改良。选择 24 ～ 28 g 雄性小鼠 96 只，按体重随机分为 8 组: 假手术组、模 型组、阳性对照依达拉奉 12 mg·kg － 1组、丁苯酞 10 mg·kg － 1组、甘露醇 2． 0 g·kg － 1组以及曲札茋苷 20， 10 和 5 mg·kg － 1组，每组 12 只。各组动物每日按 20 mL·kg － 1体重 ip 给药 1 次，连续 3 d; 对照组和模型 组给予等体积氯化钠注射液。末次给药前，小鼠以 400 mg·kg － 1水合氯醛 ip 麻醉后，仰位固定，行颈部 正中切口，分离双侧颈总动脉，用微型动脉夹同时夹 闭双侧颈总动脉阻断血流 5 min，松开动脉夹使血流 复灌 10 min，然后再阻断 5 min，如此反复 3 次; 假手 术组只分离双侧颈总动脉，不阻断血流。造模完成， 缝合伤口，将小鼠回笼饲养。于造模后 1 h 每组按 剂量腹腔注射行末次给药，24 h 后脱颈椎处死小鼠， 取脑称重，按照“4”实验方法测定脑含水量。为减 小系统误差，造模、给药、取脑及称量均平行操作。

6 对脂多糖致感染性小鼠脑含水量的影响

参考 Alexander 等的方法并加以改良。选 20 ～ 24 g 雄性小鼠 96 只，按体重随机分为 8 组: 空 白对照组、模型组、阳性对照依达拉奉 12 mg·kg － 1 组、丁苯酞 10 mg·kg － 1组、甘露醇 2． 0 g·kg － 1组以及 曲札茋苷 20，10 和 5 mg·kg － 1组，每组 12 只。各组 动物每日按 20 mL·kg － 1体重 ip 给药 1 次，连续 3 d。 空白对照组和模型组给予等体积氯化钠注射液。末 次给药前 1 h，除空白对照组 ip 氯化钠注射液外，其 余各组均按10 mL·kg － 1体重 ip LPS; 造模1 h 后行末 次给药。于造模后 6 h，脱颈椎处死小鼠，取脑称重， 按照“4”试验方法测定脑含水率。为减小系统误 差，造模、末次给药、取脑、干燥及称量均平行操作。

7 统计学处理

采用 SPSS 17． 0 软件，实验数据用 x珋± s 表示。 方差齐时，组间比较采用 LSD 检验; 方差不齐时，组 间比较采用 Dunnett's T3 检验。P ＜ 0． 05 为差异有 统计学意义。



结 果

模型组小鼠脑含水量显著高于 假手术组( P ＜ 0． 01) ，表明大脑中动脉闭塞后 25 h， 小鼠脑水肿明显。各给药组于脑梗死后 1 h 单次 ip 给药，均能不同程度降低模型小鼠的脑含水量，除曲 札茋苷低剂量组作用接近统计学差异( P = 0． 054 1) 外，其余所有给药组与模型组相比均具有统计学差 异( P ＜ 0． 05 或 0． 01) 。各组动物死亡率与模型组 相比均无显著差异。组织病理学检查显示: 假手术组脑组织形态未 见明显病理改变; 模型组小鼠脑组织可见血管和细 胞周围间隙增宽、神经细胞水肿、大量细胞明显空泡化( 气球样变) 、可见嗜酸性神经元及其固缩核等病 理改变; 各给药组与模型组相比，脑组织病理形态均 有不同程度的改善。

讨 论

脑水肿是液体在脑细胞内及细胞外间隙的病理 性聚积，脑缺血及再灌注引起的脑水肿是影响患者 急性期与亚急性期生存的重要因素。细胞毒性脑水 肿在缺血性脑卒中时即刻发生，是由于急性脑缺血 死亡细胞释放的细胞毒性物质引起，继发于神经元 和胶质细胞肿胀。随着缺血再灌注损伤的发展，各 种机制导致血脑屏障的开放或破坏，引起血浆成分 外渗至细胞外间隙，出现血管源性脑水肿。脑缺血 再灌注后的脑水肿是一种细胞毒性和血管源性脑水 肿的混合型。大面积脑水肿可致颅内压增高，使 得血管受压阻塞、管腔变窄，引起脑循环机能障碍， 形成缺血、水肿和颅内高压恶性循环。