电热恒温培养箱在油樟叶精油馏分的主要成分分

植物精油是从植物花、叶、茎、根、果实等部位中提取 的一类具有较强挥发性的植物次生代谢产物，其成分一 般由小分子、萜烯类、醇类、醛酮类等物质组成，作用机理 复杂，较难使病原菌产生抗性，在农林生物防治等领域具 有较好的应用前景。植物精油来源于天然，具有对人体相对安全、与环境友好、生物活性多样等特点，因此，从 天然植物中寻找广谱、高效、低毒的杀菌剂，已成为科研 人员及农药使用人员的共同目标。

供试材料：油樟鲜叶于2018年10 月中旬采集于江西吉安。供试菌种：尖孢镰刀菌（Fusari⁃ um oxysporum），由郑州精思威化工有限公司提供。供试 试剂：吐温-80、丙酮、PBS缓冲液、无水硫酸钠、ATP酶试 剂盒等均为分析纯。培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基 （PDA培养基）等。

ShimadzuGCMS-QP2020气相色谱质谱联用仪，日本岛津公司生产；全自动高压灭菌，上海 博迅实业有限公司生产；H-1650高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司生产；DHP-9052电热恒温培养箱， 上海一恒科学仪器有限公司生产；SW-CJ-2F超净工作 台，苏州安泰空气技术有限公司生产等。

采用水蒸气蒸馏法提 取油樟鲜叶精油，收集一定量的叶精油，并用无水硫酸钠 干燥后置于分馏瓶中，再经减压分馏（-0.073MP），收集3 种不同温度的馏分，分别为：60℃以下的馏分，标为A1号 精油；60～100℃的馏分，标为A2号精油；100～150℃的馏 分，标为A3号精油。

（1）色谱条件： Rxi-5Sil MS（30m×0.25mm×0.25μm）石英毛细管柱，载气 为高纯度氦气（99.999%），流速为1.0mL/min，气化室温度 为220℃，柱起始温度50℃（保持2min），以8℃/min的速率 程序升温到160℃，以8℃/min升温至250℃（保持15min）至 完成分析；分流比为20∶1，进样量为0.5μL。

（2）质谱条件： 离子源为EI，电子能量为70eV，离子源温度为220.0℃，进 样口温度250℃扫描范围m/z60～350。

分别取油樟叶精油 的3种馏分（A1、A2和A2）50μL、100μL、150μL、200μL与 25mL PDA混合倒平板，制得油樟叶精油的3个馏分浓度 为2μL/mL、4μL/mL、6μL/mL、8μL/mL的PDA培养基，并以 纯PDA倒平板作对照。分别将尖孢镰刀菌菌丝块接种到 培养皿中央，重复3次，25℃恒温培养5d后观察拍照，计算 抑菌率。其中，接种在对照平板上的尖孢镰刀菌菌落平均直径为Do，接种在含馏分平板上的尖孢镰刀菌菌落平 均直径为Dx，则抑菌率（%）=（Do－Dx）/Do×100 （1）

用生长速率测定法分别测定馏分A3及主要单体成分对尖孢镰刀菌菌丝 生长的抑制作用。在无菌操作条件下，向每个培养皿中 倒入9mL的PDA培养基，再分别加入1mL精油馏分A3及其 主要单体成分，对照组加入1mL丙酮，轻轻摇匀，制成平 板，待冷却凝固后，每个培养皿中接入一个生长一致的菌 饼（d=5.0mm）。重复3次，25～26℃培养7d后，再用十字交 叉法测量菌落生长直径，计算菌丝生长抑制率。相关计 算公式如下：
菌丝生长抑制率（%）=（对照组菌丝生长直径－处理组菌 丝生长直径）（/ 对照组菌丝生长直径－菌饼直径）×100 （2）

前期已采用GCMS联用仪技术对油樟叶精油的3个馏分（A1、A2和A3）进行 了测定，结果显示，A1 馏分中主要化学成分（相对百分含 量>1%）有6种：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-双环-2- 己烯、α-蒎稀、4（10）-侧柏烯、β-蒎烯、β-月桂烯和1，8- 桉叶油素；A2馏分中主要化学成分（相对百分含量>1%） 有8种：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-双环-2-己烯、 α-蒎稀、4（10）-侧柏烯、β-蒎烯、β-月桂烯、（+）-4-蒈烯、 γ-萜品烯和1，8-桉叶油素；A3馏分中主要化学成分（相对 百分含量>1%）有13种：α-蒎稀、4（10）-侧柏烯、β-蒎烯、 β-月桂烯、（+）-4-蒈烯、D-柠檬烯、γ-萜品烯、石竹烯、大 根香叶烯B、1，8-桉叶油素、松油烯-4-醇和α-松油醇。3 个馏分中含量较高的均是1，8-桉叶油素，其次是4（10）- 侧柏烯和α-蒎稀。油樟叶精油 各馏分（A1、A2和A3）对尖孢镰刀菌均具有一定的抑制效 果，并分别随着各馏分浓度的增加，抑制效果更加明显。 当浓度为8μL/mL时，对尖孢镰刀菌的抑制效果均最为明 显，抑菌率分别达到79.09%、85.51%和89.81%（表1），油樟 叶精油馏分A3抑菌率分别为馏分A1和馏分A2的1.14和 1.05倍。其中馏分A3对 尖孢镰刀菌的作用更强一些。在浓度相同的情况下 （150mg/L），油樟叶精油馏分A3、1，8-桉叶油素及α-松油 醇对尖孢镰刀菌的抑制作用从大到小依次为馏分A3＞α松油醇＞1，8-桉叶油素；而随着馏分A3、α-松油醇及1，8- 桉叶油素浓度的增加，抑制作用均增大。；随后由于馏分A3 及其主要单体成分分别抑制了尖孢镰刀菌的生长繁殖，同 时破坏尖孢镰刀菌的菌体细胞膜，使分子质量较大的还原 糖得以通过细胞膜渗出等因素，导致还原性糖含量上升。

油樟叶精油3个馏分中主要含有醇类化合物和烃类 化合物，这些化合物被广泛应用于香精香料、制药及食品 工业等领域。如1，8-桉叶油素是世界10大精油品种之 一，具有抗菌 、杀虫 、疏风解热、祛湿解毒等作用， 同时也对多种药物具有良好的透皮渗透作用 。α-松油 醇可用于香精的配制以及医药、农药、塑料、肥皂等工业 中，是玻璃器皿上色彩的优良溶剂 。α-蒎稀是合成樟 脑、松油醇、香料、树脂等化工产品的重要原料之一，具有 较好的抗肿瘤、抗真菌、抗过敏及改善溃疡等生物活性及 独特的反应多样性 。此外，油樟叶精油馏分中还含有一 些化学成分，其功效目前尚未明确，有待于进一步研究。 从天然植物精油中分离纯化抑菌活性物质，并将其 直接运用到防治，得到一种既有效控制农作物病原真菌 病害又不至于对环境及其它生物造成伤害的药剂，这不 仅能拓宽丰富的植物精油资源的用途，又能开创农作物 病害生物防治的新途径 。油樟属于樟科樟属植物，富 含有精油。本试验对油樟叶精油馏分A3及其主要单体成 分进行抑菌研究，结果显示，馏分A3及主要单体成分均具 有一定的抑菌活性，又以馏分A3效果最好，可能是由于馏 分A3多种抑菌成分协同抗菌作用的结果，因此，可作为一 种有待开发的新型杀菌物质进行研究。



 

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