恒温培养箱对小鼠血细胞及免疫器官的影响的作

糖尿病已 成 为 严 重 危 害 人 类 健 康 的 世 界 性 公 共 卫生问题之一，其根据发病原因可分为１型糖尿病、２ 型糖尿病、妊娠糖尿病和特殊类型糖尿病，其 中２型 糖尿病发病率 相 对 较 高，该 病 不 仅 对 肾 脏、酸 碱 平 衡 和心血管系统等产生严重危害，而且能引发多种并发 症，甚至 导 致 失 明、截 肢 残 疾、肾 衰 竭 尿 毒 症 等。因 此，对于２型糖 尿 病 的 预 防、改善和治疗已经成为当 前医学研究热点。

选取３月龄清洁级雄性昆明小鼠 ５０只，购于安徽医科大学实验动物中心，饲养地点为 安徽科技学院普通实验动物房。将小鼠随机分为对 照组、模型组和实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，每组１０只。

肝素钠购自深圳市海普瑞 药业有限公司，链脲佐菌素（ＳＴＺ）购自美国 Ｓｉｇｍａ公 司，酵母硒购自合肥东升牧业有限公司。ＢＣ－５３００兽 用全自动血 液 细 胞 分 析 仪 购 自 深 圳 迈 瑞 公 司，ＤＰ７２ 显微成像系统和 ＣＸ２１ＦＳ１正置荧光显微镜购自日本 奥林巴斯公司，ＭＥ３０３Ｅ电子天平购自上海梅特勒－托 利多 公 司，ＲＭ２２３５石 蜡 切 片 机 购 自 德 国 莱 卡 公 司， ＹＴ－６Ｂ生物组织摊烤片机购自湖北亚光医用电子技 术有限公司），ＧＨＰ－９１６０隔水式恒温培养箱购自上海一恒科学仪 器 有 限 公 司。汤山龙泉牌实验鼠颗粒饲 料购自南京青龙山实验动物繁殖场，其中基础饲料营 养水平：粗蛋白１８．１５％，粗 脂 肪 大 于 或 等 于４．０３％， 粗纤 维 大 于 或 等 于 ５．１２％，粗 灰 分 ７．９４％，钙 １．４３％；高脂高糖饲料营养水平：２５．０％脂肪，２０．０％ 糖，０．１％胆酸盐，基础饲料５４．９％。

实验Ⅰ～Ⅲ组和模型组饲喂 高脂高糖饲料，４周后腹腔注射ＳＴＺ，诱导构建２型糖 尿病模型，第３、７天时测空腹血糖，血糖值为１６～２０ ｍｍｏｌ／Ｌ时则为造模成功。对照组为 正 常 健 康 小 鼠， 饲喂基础饲 料，腹 腔 注 射 等 量 生 理 盐 水。将５０只 小 鼠稳定 喂 养 ４ 周 后，实 验 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 组分别饲喂添加 ０．５、１．０、１．５ｍｇ／ｋｇ的酵母硒饲料，对照组及模型组 饲喂基础日粮。８周 后 取 材，采 血 前８ｈ禁 食。小 鼠 饲养于全膜终端独立通气笼盒（ＩＶＣ）内，饲养管理及 饲养环境、用 具、ＩＶＣ 清 洗、消 毒 与 灭 菌 均 严 格 按 照 ＩＶＣ标准化操 作 规 范 进 行。小鼠垫料采用福尔马林 甲醛熏蒸消毒后备用。各组小鼠饲养环境完全相同： 自由采食和 饮 水，环 境 温 度２４～２８ ℃，湿 度５０％～ ６５％。实验期间观察并记录小鼠采食、饮水等情况。

实验结束后小 鼠 禁 食、不禁水过夜，乙醚 吸 入 麻 醉，称 重，摘 眼 球 采 集 抗 凝 血， 使用血液分析仪测定小鼠血液红细胞（ＲＢＣ）、白细胞 （ＷＢＣ）、血 红 蛋 白 （ＨＧＢ）和 血 小 板 （ＰＬＴ）等 指 标。 解剖剥离 脾 脏 和 胸 腺，器 官 称 重，计算脾脏和胸腺 指数。胸腺和脾脏经４％多聚甲醛液固定后，梯度乙 醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片５μｍ，苏木 精－伊红染 色，中 性 树 胶 封 片，显 微 镜 观 察 并 拍 照。 脾脏和 胸 腺 器 官 指 数 测 定：器 官 指 数 ＝ 脏 器 重／体 重×１００％。

采用 ＳＰＳＳ２０．０软件进行数据分 析，计量资料以ｘ±ｓ表示，组间比较采用单因素方差 分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。

各组血细胞检测结果比较 对照组 ＷＢＣ、ＰＬＴ 水平明显低于模型组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）； 实验Ⅰ～Ⅲ组 ＲＢＣ、ＨＧＢ 水平明显高于模型组和对 照组，且实验Ⅰ组 ＷＢＣ、ＰＬＴ 水平低于模型组，实 验 Ⅱ、Ⅲ组 ＰＬＴ 水平高于对照组，差异均有统计学意义 （Ｐ＜０．０５）。对 照 组、实 验 Ⅰ组胸腺重量和胸腺指数明显高于模型组，差异均有 统计学意义（Ｐ＜０．０５）；实验Ⅱ、Ⅲ组胸腺重量和胸腺 指数明显低于对照组，差 异 均 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜ ０．０５）。对照组和实验 Ⅰ、Ⅱ组脾脏重 量 和 脾 脏 指 数 明 显 低 于 模 型 组，差 异 均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；实验Ⅲ组脾脏重量和脾 脏指数明显高于对照组，差 异 有 统 计 学 意 义 （Ｐ＜ ０．０５）。对 照 组：

（１）胸腺结 构 正 常、皮 质 和 髓 质 结 构 清 晰、分 界 明 显， 胸腺皮质内淋巴细胞较多且排列紧密，胸腺髓质可见 少量的胸腺小体；

（２）脾脏显微结构正常，白髓和红髓 结构清晰，脾小结和动脉周围淋巴鞘轮廓明显，其 内 淋巴细胞较多、排列紧密。模型组：

（ 3）胸腺结构出现 异常，呈现退化趋势，胸腺皮质和髓质界限模糊，胸腺 皮质较薄，淋巴细胞排列疏松，髓质体积明显增大，淋巴细胞排列疏松，其间出现较多的空泡样结构；

（ 4）脾 脏结构出现异 常，白 髓 和 红 髓 界 限 模 糊，脾 小 结 和 动 脉周围淋巴鞘 数 量 较 少，体 积 较 小，其内淋巴细胞排 列疏松，可见少 量 空 泡 样 结 构，部 分 脾 小 结 内 可 见 大 量的斑块样 结 构。实 验Ⅰ组：

（ 5）胸 腺 显 微 结 构 明 显 改善，胸腺皮质和髓质结构清晰，皮质明显增厚，淋巴 细胞排列紧密，但 其 中 有 较 多 的 空 泡 结 构，且 髓 质 体 积明显减小，可见少量的胸腺小体；

（ 6）脾脏显微结构 明显改善，脾小 结 和 动 脉 周 围 淋 巴 鞘 明 显 较 大，髓 索 增粗，其内淋巴细胞数量增多、排列紧密。实验Ⅱ组： 胸腺显微结构有所改善，胸腺皮质和髓质分解明 显，胸腺皮 质 增 厚，淋 巴 排 列 紧 密，胸腺髓质体积较 小，淋巴细胞之间仍见较多的空泡样结构；

（ 7）脾脏显 微结构明 显 改 善，脾小结和动脉周围淋巴鞘明显较 大，其内淋巴细胞排列紧密，未见空泡样结构，髓索增 粗，髓窦较窄。实验Ⅲ组：

（ 8）胸腺显微结构无明显变 化；

（ 9）脾脏 白 髓 较 小，红 髓 较 大；脾 小 结 和 动 脉 周 围 淋巴鞘明显较小，但未见有斑块样结构。

硒的适量补充可对人体产生明显的有益影响，其 分为有机硒和 无 机 硒，其 中 无 机 硒 毒 性 较 大，而 有 机 硒具有低毒性、高生物安全性、良好水溶性、机体易吸 收等优点，被广泛应用于保健方面。有 研 究 显 示，硒 的缺乏可抑制骨骼肌肉系统和神经系统发育及免疫 功能，导致儿童身高、体重和智力明显降低，同时可导 致胰岛素合成分泌相关型基因及硒蛋白基因表达失 调，引起糖代谢及脂质代谢紊乱和脑细胞氧化应激， 进而诱导阿尔茨海默病的发生。然 而，适 量 的 补 充硒具有以 下 作 用：

（１）可增强机体谷胱甘肽过氧 化 物酶和总超氧化物歧化酶活性，促 进 氧 自 由 基 的 清 除，抑制其对细胞的破坏，提高机体抗氧化功能；

（２）可增加 Ｔ 淋巴细胞数量，促进细胞因子的合成分 泌，升高免疫球蛋白 Ｇ 含量，增强巨噬细胞 的 吞 噬 活 性，提高机体免疫功能；

（３）可激活α－酮戊二酸脱氢 酶系，参与辅酶 Ａ、辅酶 Ｑ 的生物合成，调控人体糖、 脂肪、氨基酸３大营养物质分解代谢。本研究通过 在饲料中添加不同剂量的酵母硒，探讨了其对２型糖 尿病小鼠血细胞及免疫器官的影响。