真菌多样性及根腐病拮抗菌的筛选

蓝莓（Vaccnium sp.）为杜鹃花科（Ericaceae） 越桔属（Vaccinium）多年生常绿或落叶灌木，具 有很高的经济价值。由丽赤壳属（Calonectria）、 镰孢属（Fusarium）真菌引起的蓝莓根腐病是蓝 莓主产区的重要病害。病原菌通过土壤进行传 播，侵染蓝莓后可导致全株死亡。贵州省蓝莓 根腐病由尖镰孢菌（F. oxysporum），主要 依靠传统的化学防治，对蓝莓果实品质会造成一 定影响。因此，寻找环境中有益微生物是目前防 治蓝莓根腐病的发展方向。

1 材料与方法

1.1 土壤样品采集

于 2017 年 4—7 月，选择贵阳麻江县蓝莓种 植基地（东经 107°43′07″、北纬 26°25′49″）蓝莓 发病区附近健康蓝莓植株，利用抖根法获得根际 土壤样品，该基地蓝莓根腐病发生率为 18.5% 左 右。根际土壤样品沿等高线分别设置 5 个样地 （5 m×5 m），在各样方随机选择 8 株土壤样品采 集。土壤样品装入无菌袋，便携式低温保温箱中带回实验室，冰箱低温保存（4 ℃）。

1.2 根际土壤真菌的分离培养

1.2.1    供试培养基

蓝莓根际土壤真菌的分离和纯化采用马铃薯 葡萄糖培养基（PDA）、察氏培养基（Czapek）、 马 丁 氏 培 养 基 （ Martin） 和 孟 加 拉 红 培 养 基 （PDAm）。

1.2.2    土壤真菌的分离培养

5 个样地采集到的根际土壤等量混合作为 供试土壤。采用平板稀释法，将土壤样品稀释至10−2 倍，静置 5 min 后选取 200 μL 上清液在 PDA、 Czapek、Martin 和 PDAm 中进行涂布，每种培 养基设置 10 个重复。利用菌丝末端挑取法，分 别挑取 4 种不同平板培养基中生长形态差异典 型的真菌菌株转接至 PDA，28 ℃ 恒温培养 箱（黑龙江东拓仪器有限公司，中国）培养，纯化 3～5 次。

2 结果与分析

由表 1 可知，利用平板稀释法共分离获得的 菌落形态具有明显差异的真菌 80 株。通过 rDNAITS 序列进行比对分析后发现，80 株真菌分别隶 属 6 个纲 6 个目 11 属 51 种，这些菌株与 NCBI 数据库中的已知真菌 rDNA-ITS 序列相似性都达 到了 99% 和 100%，同源性非常高。在分离得到 的 80 株真菌中，青霉属（Penicillium）14 种、木 霉属（Trichoderma）13 种、镰孢属（Fusarium）7 种、孢球托霉属（Gongronella）5 种，篮状菌属 （Talaromyces）3 种、拟青霉属（Purpureocillium）3 种、毛壳属（Chaetomium）2 种，毛霉属 （Mucor）2 种、曲霉属（Aspergillus）、粘帚霉 属 （ Gliocladium）、 拟 小 球 壳 孢 属 （ Microsphaeropsis）各 1 种。其中，青霉属分离得到的菌 株数量最多，为蓝莓根际土壤真菌群落的优势 属，占菌株总数的 27.50%。子囊菌门中，木霉属 和镰孢属次之，均占菌株总数的 16.25%。篮状菌 属、毛壳属均占菌株总数的 5.00%。粘帚霉属、 拟青霉属和曲霉属分离得到菌株数相同，各占总 菌株数的 3.75%。小球壳孢属只分离得到 1 株， 占总菌株数的 1.25%。接合菌门的孢球托霉属分 离得到 13 株，同样为优势属，分离频率为 16.25%。 毛霉属真菌分离得到 2 株，分离频率为 2.50%。

3 结论与讨论

上海一恒对有关蓝莓根际土壤真菌研究的较少。虽然蓝 莓为栽培种植，但了解蓝莓根际土壤真菌多样性 对其土壤真菌种群特性研究具有重要意义。本研 究从蓝莓根腐病发生区附近健康蓝莓根际土壤中 分离得到的真菌，主要属于青霉属（27.50%）、 木霉属（16.75%）、镰孢属（16.75%）、孢球托 霉 属 （ 16.75%）， 篮 状 菌 属 （ 5%）、 曲 霉 属 （3.25%）和小球壳孢属（1.25%）等，与研究的 其他物种根际土壤真菌相近。蓝莓根际土壤 真菌的优势属与其他物种根际土壤的优势种群相 似，但在种群组成上存在一定差异，可能是由于 蓝莓菌根菌的存在所致。