上海一恒科学仪器有限公司在前篇文中已经有介绍过二氧化碳培养箱的工作原理了，文中，我们介绍如何使用上海一恒BPN-80CH(UV)二氧化碳培养箱。
1、一定要做好使用前的准备工作
一恒BPN-80CH(UV)二氧化碳培养箱应由专人负责使用, 操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后 , 不要随意扭动 , 以免影响箱内温度 , 二氧化碳浓度, 湿度的波动 , 同时降低机器的灵敏度。箱子的放置要水平,避免阳光直射和灰尘等 , 要保证仪器周围的气流循环 , 后部及侧面应留出5cm 的空隙。加装稳压电源保证电源电压波动不超过 220V ±10%。所加入的水必须是蒸馏水或无离子水, 防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用, 经常检查箱内水是否足够,水位应加至 “水位指示灯” 灭灯时为止。使用前箱内应用消毒酒精或碘溶液彻底擦洗, 防止其他微生物污染 , 导致实验失败 。在房间安装空调 , 使环境温度保持在 25℃左右 。所使用的二氧化碳必须是纯净的 , 否则降低二氧化碳传感器的灵敏度和污染二氧化碳过滤装置 。
2、正确充气延长二氧化碳传感器使用寿命
一恒BPN-80CH(UV)二氧化碳培养箱箱内气压由二氧化碳气体传感器控制。二氧化碳传感器正常反馈要求进气压为0.06MPa。当箱内气压降低时 , 二氧化碳传感器在低压刺激下有节奏地开闭 , 向箱内慢慢充气 , 当进气压达0.1MPa 时, 自动停止调节。如充气方法不当, 使进气压力增大 , 当超过 0.1MPa 甚至0.2MPa压力 , 会损伤二氧化碳传感器 。开始这种损伤效应不明显, 不易察觉, 反复错误操作 , 二氧化碳传感器损伤累积最终致命损坏, 使气压调节失灵 。因此, 二氧化碳传感器寿命与二氧化碳进气压大小有关, 只要做好进气压调节 , 就能保护二氧化碳传感器性能。二氧化碳传感器价格昂贵 , 更换不易, 所以一定要做好进气压调节 , 延长二氧化碳传感器使用寿命。
3、做培养时注意培养箱湿度
箱内湿度对于培养工作来说是一项非常重要然而又经常被忽略的因素。因为饱和湿度环境可以避免培养液中二氧化碳逃逸 , 培养液中 pH 值稳定 ,有利于细胞生长 , 足够的湿度水平并且要有足够快的湿度恢复速度 (如在开关门后)才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。所以二氧化碳培养箱使用过程中, 在箱内托盘中放一定量的灭菌水(3/2至全盘), 使箱内成为饱和湿度环境。如使用者忘记补加水 , 使培养细胞处于低湿度甚至干热环境中, 培养液二氧化碳气体易挥发, 液体 pH 值升高, 影响细胞生长, 在工作中要力求避免此问题发生。样本多时, 箱内分区存放 , 培养物用筐或瓷盘存放 , 这样存取快速 , 缩短开门时间, 减少箱内气
体和湿度变化, 节省气体 , 稳定了细胞生长环境 。
4、防止二氧化碳培养箱污染做好箱内消毒
一恒BPN-80CH(UV)二氧化碳培养箱污染是导致细胞培养失败的一个主要因素, 所以要减少和防止污染的发生 , 主要途径是尽量减少微生物可以生长的区域和表面, 采取消毒措施。例如, 针对箱内湿热环境易滋生细菌等问题, 我们采用在1000mL 水中加2mL 新洁尔灭液, 定期用酒精和紫外线消毒箱内空气 , 培养物酒精擦拭入箱内, 盘里的水至少要一周换一次 , 控制污染 , 可以维持适应的蒸发作用, 减少箱内微生物滋生速度 。为了培养箱免受污染并且保证仪器箱体内的生物清洁性, 有些二氧化碳培养箱设计了自动排除污染装置来有效防止污染的产生 。目前有多种消毒灭菌方式, 如带有紫外消毒功能的 CO 2 培养箱 。还有的设计生产了 HEPA 过滤器能过滤培养箱内空气, 可过滤除去 99.97%的 0.3 μm 以上的颗粒 , 此外, 还有设计了能使箱内达到高温湿热的环境从而杀死污染微生物 , 达到消毒灭菌目的的培养箱 。
5、二氧化碳培养箱零点飘移的监控和零点的调整
培养箱使用过程中 , 二氧化碳零点会发生自然飘移现象, 这种现象不能在箱面气体显示框中表现出来, 使用者也不易觉察到飘移结果 。二氧化碳零点是否飘移 , 可通过二氧化碳气体测试仪 , 从控制盘上的采样口可以采到培养箱内的气体, 然后用气体色谱仪就可以测到二氧化碳浓度了 。二氧化碳培养箱零点的调整的步骤 (一般以空气为标准来校零, 每半年进行一次 , 以 Thermo3111 型为例):
(1)把二氧化碳浓度设定值设为零 , 目的是不让钢瓶中二氧化碳进入箱内 。
(2)打开所有的门 5 min, 往水盆内加上水,关上所有的门, 稳定 12h 以上。
(3)等温湿度充分稳定后 , 观察二氧化碳浓度显示值是否为零, 若不为零 , 校正至零 (按 Mode键至Cal 档, 按左键或右键选择至显示 “CO2 CALXX .X”, 用上键或下键把数值调为零, 然后按 En-ter 键确认)。
(4)重新把二氧化碳浓度设定值设回 (如5.0 %)。
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