银杏外种皮中银杏酸的工艺研究-一恒干燥箱的使

银杏 Ginkgo biloba L． 为银杏科银杏属多年落叶乔木。银杏酸是分布于银杏叶、果和外种皮中的 生物活性物质，在外种皮中含量最高。其为一系 列弱极性化合物，包括白果新酸、白果酸、十七烷二 烯银杏酸、氢化白果酸以及十七烷一烯银杏酸 5 种 主要成分，其中白果酸含量最高，也是目前对银 杏烃基酚酸类化合物进行定量检测的主要指标。 银杏酸对多种肿瘤细胞有较强的抑制作用，可抑制 肿瘤 细 胞 增 殖、侵 袭、迁移及诱导肿瘤细 胞凋亡，有较好的研究价值及市场应用前景。银杏 外种皮是银杏果实的最外层肉质皮，常被作为废弃物，以其为原料提取银杏酸，有助于资源的充分利 用。然而，在外种皮开发利用及工艺研究过程中，还 存在问题: 银杏外种皮的开发利用工作还处在实验 室的探索研究阶段，未进行工厂化大规模生产，落后 于银杏叶的开发利用。

1 材料与方法

1． 1 仪器与试剂

1． 1． 1 仪器

FA2204B 型电子天平( 上海精科天美科学仪器有限公司) ，LC-20A 型高效液相色谱仪 ［岛津企业管理( 中国) 有限公司］，IKA 旋转蒸发仪 ( 上海人和科学仪器有限公司) ，XW-80A 型微型旋 涡混合仪( 上海沪西分析仪器厂有限公司) ，L550 型离心机( 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司) ，MilliQ Advantage A10 型超纯水系统( 密理博( 中国) 有 限公司) ，GＲ150A 型粉碎机( 合肥荣事达小家电有 限公司) ，DHG-9420A电热恒温鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。

1． 1． 2 试剂

银杏外种皮( 购买于山东临沂药材 市场，经蚌埠医学院中医药基础教研室李红梅老师 鉴定为银杏科银杏属植物银杏的外种皮) ，碳酸氢 钠( 分析纯，天津市大茂化学试剂厂) ，盐酸( 分析 纯，江苏彤晟化学试剂有限公司) ，白果酸标准品 ( 上海源叶生物科技有限公司，纯度 ＞ 95% ) ，甲醇、 乙腈( 色谱纯，美国天地有限公司) ，三氟乙酸( 分析 纯，天津市大茂化学试剂厂) 。 1． 2 溶液配制 1． 2． 1 供试品溶液的制备 取银杏外种皮粉末适 量，加碳酸氢钠水溶液碱提，过滤取滤液，用盐酸调 pH，酸沉，过滤取滤渣，干燥即得。

1． 2． 2 对照品溶液的制备

取白果酸标准品，精密 称定 5． 0 mg，色谱甲醇溶解配成 9． 6 mg /mL 的白果 酸对照品储备液，用色谱甲醇依次稀释 2 倍，得到系 列浓 度 工 作 液，依 次 为 4． 8、2． 4、1． 2、0． 6、0． 3、 0． 15 mg /mL。

1． 3 色 谱 条 件

色 谱 柱: Waters Sun FireTM C18 ( 4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ; 检测器: 岛津 SPD-20a ; 波长 310 nm; 柱温 30 ℃ ; 流速 1 mL /min; 进样量 20 μL; 流动相为 0． 05% 三氟乙酸水溶液( A) － 乙 腈( B) ，梯度洗脱( 0 ～ 30 min，75% B→90% B; 30 ～ 35 min，90% B; 35 ～ 45 min，90% B→75% B) 。

1． 4 方法学考察

1． 4． 1 标准曲线绘制

分别取“1． 2． 2”项下不同 浓度的对照品工作液，按照“1． 3 色谱条件”进样分 析，记录峰面积。

1． 4． 2 专属性

分别取对照品溶液和供试品溶液 20 μL，按照“1． 3 色谱条件”进行分析。

1． 4． 3 加样回收率试验

精密称取已知含量的银 杏外种皮粉末 0． 1 g 6 份，分别加入精密称定的白果 酸对照品，按照“1． 2． 1”项下方法处理，按“1． 3 色谱 条件”测定 6 份混合后的峰面积，计算回收率。

1． 4． 4 日内精密度

取同一银杏外种皮提取液，按 照“1． 3 色谱条件”连续进样 6 次分析，测峰面积并计算相对标准偏差( ＲSD) 。

1． 4． 5 日间精密度

取同一份银杏外种皮提取液 按照“1． 3 色谱条件”连续 3 d，每天连续进样 3 次， 测峰面积并计算 ＲSD。 1． 4． 6 重复性试验 按照“1． 2． 1”项下方法制备 同一浓度银杏外种皮提取液 6 份，“1． 3 色谱条件” 进样分析，测峰面积并计算 ＲSD。 1． 4． 7 稳定性试验 取同一银杏外种皮提取液，分 别于 0、12、24、48、96、120 h 按照“1． 3 色谱条件”进 样分析，测峰面积并计算 ＲSD。

2 结果

以峰面积为纵坐标( Y) ，浓 度为横坐标( X) ，得线性回归方程为 Y = 5E + 6X + 685 953，r = 0． 999 4 ( n = 6) ，结果表明银杏酸在 0． 15 ～ 4． 8 mg /mL 浓度范围内具有良好线性关系。 2． 1． 2 专属性 待测组分峰形良好，白果酸对照品 保留时间为 26． 8 min，分离度 ＞ 2，与其他峰可达到 基线分离( 见图 1) 。

单因素试验结果表明，随着料液 比增加，白果酸含量先增加后减少，1∶ 10 料液比下银杏外种皮中银杏酸含量较高。随着碱液浓度增 大，银杏酸含量变化幅度平缓，考虑到生产成本，碱 液浓度选择为 3% 。随着碱提时间增加，白果酸含 量逐渐增加并达到平缓趋势，因此最佳碱提时间选 择为 1 h。不同酸沉 pH 对应的白果酸含量相差无 几，为节约盐酸用量，选择酸沉 pH 为 5 作为最佳酸 沉 pH。随着酸沉时间延长，对应的白果酸含量增加 趋势较小并保持平缓，因此最佳酸沉时间选择为 1 h。

3 讨论

中国是银杏之乡，为了充分利用资源优势，人们 对银杏资源研究逐渐深入，近年来研究表明，银杏外 种皮中的有效部位银杏酸在抗菌、抗炎、杀虫等 方面具有很好的活性，也可抑制多种肿瘤的生长，已应用于医学研究、生物农药和化妆品等 方面。银杏外种皮中含有丰富的银杏酸，从中提取 银杏酸，可充分利用资源优势，变废为宝，具有广阔 的应用前景。利用银杏酸具有的酸性化学性质，以银杏外种皮为原料，采用碱提酸沉法提取银 杏酸，通过正交试验确定最佳提取条件。