上海一恒分析葛仙米多糖提取工艺

葛仙米（Nostoc sphaeroides Kützing）是蓝藻门念珠 藻科的一种低等单细胞蓝藻，古名天仙菜、天仙米，俗 称水木耳。据《纲目拾遗》记载，葛仙米“性寒，味甘 爽”，具有“解热，清膈，利肠胃”的功效。现代关于葛 仙米的研究包括基础物质、药理活性以及提取工 艺。通过对这些研究报道分析，葛仙米多糖以其含量最高、活性最强及研究报道最为详尽为葛仙米中最 重要的成分。而对葛仙米多糖的研究，提取为初始步 骤，尤为重要。目前关于葛仙米多糖的提取研究，主要 包括单因素、正交等，而尚未发现响应面法提取葛仙 米中多糖的工艺研究。

葛仙米：湖南炎帝生物科技有限公司；葡萄糖醛 酸、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖：中国食品 药品检定研究院。 三氟乙酸（trifluoroacetic acid，TFA）、1-苯基-3-甲 基-5-吡唑啉酮 （3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5- one，PMP）、95 %乙醇（分析纯）：国药集团化学试剂有 限公司。 水浴锅（HWS24）：上海一恒科学仪器有限公司； 离心机（ST16R）：赛默飞世尔科技公司；旋转蒸发仪 （RE-2000B）：上海亚荣生化仪器厂；高效液相色谱仪 （Uitimate 3000）：赛默飞世尔科技公司；电子天平（XSE 205DV）：梅特勒-托利多国际贸易有限公司；超声仪 （HNS-SY-150）：北京同德创业科技有限公司。

色谱柱：Welch Xtimate （4.6 mm×250 mm，5 μm）， 检测波长：260 nm，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL，流动相：以 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲溶液（用 3 mol/L 氢氧化钠调节 pH 值至 6.7）为流动相 A，乙腈 为流动相 B，梯度洗脱，流动相梯度洗脱程序见表 1。

分别精密称取甘露糖、氨基葡萄糖、鼠李糖、葡萄 糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖及岩藻糖标 准品 100 mg 于 10 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀， 即得 9 种单糖的标准储备溶液。再配置成浓度分别为 0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L 的不同浓度梯度单糖混合标 准溶液。分别取 100 μL 的单糖标准液及不同浓度梯度 的混合标准溶液，各加 200 μL、0.6 mol/L 的 NaOH 溶 液，置于 10 mL 的具塞试管中，漩涡混匀；再加 400 μL、 0.6 mol/L 的 PMP 甲醇溶液，漩涡混匀，充入 N2，在 70 ℃的烘箱中避光反应 110 min，取出避光冷却至室 温，加 400 μL、0.3 mol/L 的 HCl 溶液中和，加水至 2 mL， 再加等体积的氯仿，漩涡混匀，静置，弃去氯仿相，如此 萃取 3 次。将水相用 0.45 μm 微孔膜过滤后供高效液 相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC） 分析。

最终，通过回归模型分析，以多糖水解后单糖总量得 率为评价指标，葛仙米多糖适宜的提取工艺参数为浸 提时间 110 min、浸提温度 97 ℃、料液比 1 ∶ 230（g/mL）； 在此条件下，得到单糖总量得率为 29.14 %，实际值与 理论值基本相符，说明模型对葛仙米多糖提取工艺条 件参数优化可靠可行，具有一定的实用价值。



 

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