分子生物学鉴定

材料与方法

LX-100 手掌型离心机（江苏海林市其林贝尔仪器制造有限公司）；2-16PK 型高速台式离心机（SIG－ MA 公司）；PCR 仪（TaKaRa）；YP202N 电子天平（上 海精密科学仪器有限公司）；DYY-6C 型电泳仪（北京 市六一仪器厂）；微波炉（青岛海尔制品有限公司）电 泳槽（北京君意东方电泳设备有限公司）；Hws24 电热 恒温水浴锅 （上海一恒仪器有限公司）Gel Doc 2 000 紫外凝胶成像分析系统（美国 Bio-RAD）。Ex Taq DNA 聚合酶、Ex Taq Buffer、DNA Marker （2 000）、DNA 提取试剂盒 （TIANamp Genomic DNA Kit）、超净水、引物、核酸电泳缓冲液（TAE）、6×Load－ ing Buffer、琼脂糖（AGAROSE G-10）、dNTP Mixture、 溴化乙锭（EB）。

结果

目前用于构建系统发育树的基因，以线粒体 pcox1 和核糖体 ITS1、ITS2 基因应用最为广泛。其 中，在使用 pcox1 基因作为分子标记时范围没有核糖 体 ITS1、ITS2 基因那么广。pcox1 和 ITS 都拥有高度 的保守性，但 pcox1 基因的特点为种内分化弱，种间 分化强，而 rDNA 序列功能上具有进化时钟性，目前 已经被应用到物种分类与进化分析中，尤其是种间 的分类。ITS 进化快，物种内发生变异的几率小， 物种间发生变异的几率大。通过分析 ITS 序列可以 构建进化树并分析其亲缘关系。但是实验由于基因 库中没有片形褶皱绦虫的 pcox1 基因，所以用 pcox1 作为目的基因只鉴定了该未知虫体的属，而无法确 定鉴定该绦虫具体是什么，而基因库中有片形褶皱 绦虫 ITS 的序列，所以我们可以确切的证明未知绦虫 为片形褶皱绦虫。

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