恒温水浴锅的检测因素的优化

实 验

培养基：营养琼脂培养基、抗生素检定培养基 II （北京陆桥技术有限责任公司）。 仪器设备：生化培养箱 36± 1 ℃（BINDER），生物 安全柜（ESCO）光度计 450 nm（赛默飞），pH 计(梅特 勒-托利多仪器有限公司)，移液器(Thermo)，电子天 平(梅特勒-托利多仪器有限公司)，恒温水浴锅（上海一恒），游标卡尺，牛津杯，培养皿，离心管，陶瓦盖。试剂：三级水，实验室自制；生理盐水（分析纯）， 天津市大茂化学试剂厂；磷酸盐缓冲液，北京陆桥技 术有限责任公司。 实验菌种：藤黄微球菌（Micrococcus luteus）CMCC （B）28001第二代，CICC 10445第二代。 标准品：青霉素标准溶液（Dr）、β-内酰胺酶标准 溶液（SIGMA、中国食品药品检定研究院）、舒巴坦标 准溶液（Dr）。

结果与分析

采用不同来源标准菌株。藤黄微球菌（Micrococcus luteus）CMCC（B）28001第二代菌36±1 ℃培养20~24 h 菌落大，菌苔厚，利于制备菌悬液。CICC 10445第二 代菌株生长较慢，36± 1 ℃ 培养 18~20 h 菌苔较小、透 明且薄，不利于菌悬液制备，若使用CICC 10445作为 实验菌株最好选用活化培养22~24 h的菌苔制备菌悬液。检出限为4 U/mL，采用品牌1可满足方 法要求，但有 72%概率出现假阳性，会造成资源浪费； 品牌2可满足方法要求；品牌3 不能满足方法要求，有 16%的漏检概率。采用不同品牌β-内酰胺酶标准品 对实验结果的准确性有影响。用杯碟法检测β-内酰胺酶，主要是利用舒巴坦特 异性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作为对 照，通过比对抑菌圈的大小来间接测定样品中有无含 有β-内酰胺酶类药物。试验中菌株、β-内酰胺酶、 青霉素等是试验中应注意的关键因素，把控其最优条 件有利于提高试验的准确性。

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