2019-04-16 08:52
环境监测领域微生物监测指标主要有粪大肠菌群、总大肠菌群、细菌总数等，用于指示地表水、地下水、海水、工业废水、生活污水受粪便污染的情况。在各类水质环境质量及排放标准中都有相应的微生物标准限值，如何为管理部门决策提供准确无误的监测数据就显得非常重要。保证数据的准确无误，除了正确选择标准分析方法，规范操作，实验室内质量控制起着关键性的作用。与化学分析项目不同，微生物样品国内目前尚无有值标准物质，国外的标准物质价格昂贵，不能用于日常数据监控，数据分析的准确性则要从实验室的各个环节进行控制。
无菌室建设：
废水尤其是医疗机构废水样品中可能含有如大肠埃希氏菌、克雷伯氏菌、肠杆菌属、结核杆菌、病毒等的人际传播病原微生物，按照相关规定，从事此类实验活动的实验室，其生物安全防护水平应为二级实验室。建立二级实验室，首先要向市级卫生主管部门备案。要满足二级生物安全级别要求，除了要配备生物安全柜、恒温恒湿机组外，还要对实验室的布局、通风管道、门窗等进行建设。在基本条件具备之后，经过专业机构进行验收( 如立项报告和相关文件、实验微生物危害评估报告、设计任务书、设计说明和设计图纸、第三方检测报告等) 后方可使用。从日常用阳性菌株、人员和样品防护、实验室硬件条件等方面综合考虑，依据相关标准和条例，环境监测领域微生物检验，必须建立生物安全二级实验室。实验室内质量控制
1 培养基
市售商品化培养基基本可以满足环境监测领域实验室常规微生物项目的检测需要，但需建立一套程序文件和作业指导书，用于对供应商的评估，对培养基进行技术性验收，对培养基配制及使用过程进行监控。 供应商/品评估供应商必须提供通过国际质量体系认证的产品，优先选用同时通过CNAS认证产品; 必须提供培养基质量测试报告、培养基生产执行的标准文号和生产批号; 必须提供所生产的培养基的配制和使用说明书及保存条件和有效期。每年进行一次合格供应商评估。
2 培养基的验收
每批新购培养基，均应进行外观检查( 包括生产日期和保质期等) ，具体参数参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》中的相关要求进行，并用标准样品或标准菌株进行技术性验收，验收方法参照《食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求》的相关要求进行，填写相应的培养基验收记录。培养基必须满足验收参数要求方可使用，否则作退回处理。技术性验收时可使用有证标准样品或标准菌株，标准物质应为来自于( 英国) 国家菌种保藏中心 、美国菌种保藏中心、中国工业微生物菌种保藏管理中心、中国医学微生物菌种保藏中心的产品或其传代产品。
1 培养基的制备应按照厂商提供的说明对培养基进行配制并灭菌，同时进行灭菌效果监控( 温控胶带) ，填写相应的培养基配制记录和压力蒸汽灭菌器灭菌监控及使用记录。若温控效果不合格，则该批培养基不能使用，应查找原因，采取纠正措施后重新配制。
2 培养基的期间核查和新开封核查培养基开封后，如果保存不当，如潮湿、高温等环境影响，有可能发生质量改变，所以若在保质期内但已超过6个月未使用完，应在开封后每6个月进行1次期间核查; 每新开封1瓶培养基时，也应对其进行技术性检查，并填写相应的培养基期间核查监控记录。培养基必须满足技术性参数要求方可继续使用，否则应做作废处理。超过保质期的培养基应做作废处理。可用标准样品或标准菌株对培养基进行期间核查，新开瓶培养基检查可用标准样品或标准菌株，也可用已知阳性样品( 已知阳性样品是指已分析样品中阳性管中的菌液，用以替代标准样品或标准菌株) 。
3 培养基的贮存和使用商品化的即用型培养基，严格按照厂商提供的贮存条件、有效期和使用方法进行保存和使用。配制好的培养基，以少量勤配为宜，已灭菌的培养基可在4℃ ～ 10℃ 存放1个月，同时应注明配制日期。
4 培养基的弃置使用后的培养基( 包括结果显示阴性的培养基) 应在实验完成后立即灭菌弃置，未使用的培养基超过规定保存期限后也应灭菌弃置，并填写压力蒸汽灭菌器灭菌监控及使用记录。 无菌室无菌室每次使用前应按照技术要求进行紫外灯灭菌生物安全柜按照产品说明书请生产厂家进行定期维护。
3 灭菌设备
湿热灭菌器每月至少用生物指示剂进行1次灭菌效果监测，每次使用时用温控指示胶带进行灭菌效果监控。生物指示剂或指示条需由经国际质量管理体系认证的供应商提供。灭菌设备( 干热灭菌箱和湿热灭菌器) 至少每年由有资质的计量检定部门进行1次检定.待灭菌的物品不要摆放得过于拥挤，应保留一定的空间。灭菌后的物品应置于无菌室专门空间存放或置于消毒柜中暂存。灭菌后的物品2周内未使用，需重新灭菌。
4 电热恒温培养箱
电热恒温培养箱温度的准确性直接影响检测结果的准确性，是非常重要的技术指标。电热恒温培养箱应每年由有资质的技术部门检定一次，检定指标为温度和均匀度。培养箱的示数应按照检定证书的修正值进行修正。培养箱使用期间应每天进行温度监控。如长时间未使用，应每月开机进行一次期间核查，确保设备状态良好。
5 结论：
上述质控手段在大连市环境监测中心经过近2a多的应用，取得了比较理想的效果。环境监测领域微生物的检测，除严格按照相关的方法标准、规范进行实验操作，无菌操作手法专业规范外，执行上述对培养基、无菌室、灭菌设备、培养箱的质量控制后，辅以常规的人员比对、实验室间比对等手段，基本可以保证出具检测数据的准确性。