2019-12-18 09:49
风湿痹痛是临床常见的病症之一,由于其具反复发作 的特点,需要长期用药,而长期服药容易蓄积中毒。针灸法 是临床治疗风湿痹痛证常用的方法之一,具有安全、经济、 简便、毒副作用小等众多优点,逐渐受到国内外医学界的 关注。临床中常采用针灸配合中药联合治疗,如中药汤 剂辅助艾灸、中药贴膏辅助针灸等。隔膏灸是在艾灸基 础上发展起来的一种针灸方法。治疗风湿关节病的药膏具 有发散风寒,袪湿止痛的作用;艾灸亦有温热作用,两者合 而为之,相辅相成,更易促进药物的吸收,达到通经活络、 治疗风湿痹痛的作用。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Milli-Q 超纯水系统 (德国墨克生命科学公司);BT125D 电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);一恒DHG-9240A 型电 热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);DT1028H 型 超声波清洗器(德国 BANDELIN 有限公司);HHS-11S 数显 恒温水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂);玻璃仪器气流烘干器 (上海豫康科教仪器设备有限公司);Agilent 1100 Series 型 高效液相色谱仪 (美国 Agilent 科技有限公司),DAD 检测 器;WFH-201B 紫外反射透射仪(上海精科实业有限公司)。
1.2 材料
乙腈、甲醇、异丙醇均为色谱纯(天津市大茂化学试剂 厂);三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、浓氨试液、环己烷等均为 分析纯(天津市大茂化学试剂厂);水为超纯水(Milli-Q 超 纯水系统);硅胶 GF254 板(青岛海洋化工厂分厂);自制 含 1%氢氧化钠溶液的硅胶 G 板;5%香草醛硫酸溶液(新 制);芍药苷对照品(批号:170829,含量>98%,中国食品药 品检定研究院);延胡索乙素对照品 (批号:18012213,含 量>98%,中国食品药品检定研究院);炒白芍、醋延胡索、 雷公藤等研究所用药材饮片均购自佛慈养生堂,经甘肃中 医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定均为正品。
2 方法与结果
2.1 风湿痹痛膏的制备工艺
按处方药量称取炒白芍、醋延胡索、制草乌等 6 味中 药,加 6 倍量纯化水,浸泡 1 h,回流提取 1 次,提取 1.5 h,静置沉淀,滤过,将滤液浓缩,得到相对密度为 1.21~1.24 的浸膏,加入 5 g 土鳖虫粉,混匀,文火煎熬至规定的 相对密度(不低 1.31),冷却,即得。
2.2 TLC 鉴别
2.2.1 炒白芍的鉴别
取风湿痹痛膏 0.5 g,加 50%甲醇 50 mL,超声(50 kHz、25 ℃)处理 20 min,取上清液作为供 试品溶液。取缺炒白芍阴性样品,按供试品制备方法制成 阴性对照溶液。再取芍药苷对照品,加乙醇制成 1 mg/mL 的对照品溶液。分别吸取上述溶液 10 μL,点于同一硅胶 GF254 薄 层 板 上 , 以 三 氯 甲 烷 - 乙 酸 乙 酯 - 甲 醇 - 甲 酸 (40.0∶5.0∶12.0∶0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 5 % 香草醛硫酸溶液,105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色 谱中,与对照品相应的位置处,显示相同的蓝紫色斑点,且 阴性无干扰。见图 1。
2.2.2 醋延胡索的鉴别
取 0.5 g 风湿痹痛膏,加浓氨试 液 5 mL,三氯甲烷 60 mL,超声(50 kHz、25 ℃)处理 20 min, 滤过后蒸干,加甲醇 1 mL,即得供试品溶液。另取延胡索 乙素对照品,加甲醇制成 0.5 mg/mL 的对照品溶液。分别 吸取上述溶液 10 μL,点于同一用 1%氢氧化钠溶液制备 的硅胶 G 薄层板上,以浓氨试液-乙酸乙酯(6∶4)为展开剂,展开,取出,晾干,以碘蒸气熏至斑点显色清晰,挥 尽碘后,在紫外光(365 nm)下检视。发现供试品色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色的荧光斑 点。阴性无干扰。见图 2。
3 讨论
3.1 白芍鉴别考察了不同提取溶媒 (甲醇、50 %甲醇和 乙醇),比较发现以乙醇为溶媒,所得图谱斑点清晰,因此 供试品溶液制备选用乙醇提取;采用 2015 版《中华人民共 和国药典》一部薄层色谱法(通则 0520)展开剂展开,分离 效果较差,Rf 较小,进而加大了流动相的极性,所以增加 甲醇的用量,最终选择氯仿∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸 (40.0∶ 5.0∶12.0∶0.2)为展开剂,分离良好,斑点清晰可见,此外, 建议炒白芍薄层应先喷洒 5%香草醛硫酸溶液,之后在 105 ℃加热,以使色谱点更清晰。
3.2 延胡索鉴别参照 《中华人民共和国药典》2015 年版 一部方法,得到的醋延胡索的 TLC 图分离度差,斑点不清 晰,拖尾严重,可能是受处方中其他药材的影响,复方中 单味药的薄层鉴别按照《中华人民共和国药典》方法,其 结果不太理想。最终选择浓氨试液-乙酸乙酯 (3∶2)为展开剂,在该条件下供试品分离度好、斑点清晰, 因此选用该展开体系作为醋延胡索的薄层展开条件。
3.3 风湿痹痛膏中芍药苷含量最高为 3.38%,最低为 2.00%, 平均为 2.77%,因此,建议风湿痹痛膏中芍药苷含量应不 低于 1.94%。
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