2019-12-04 10:09
二丁颗粒为 2015 年版 《中国药典》收载的中 药成方制剂，由紫花地丁、半边莲、蒲公英、板蓝 根 4 味药材组成，功效清热解毒，用于火热毒盛所 致的热疖痈毒、咽喉肿痛、风热火眼，可治疗痤疮、慢性支气管炎、急性咽炎等。
1 材料
1. 1 仪器
Agilent 1260 高效液相色谱仪，配置 UV 型紫外检测器、安捷伦工作站 ( 美国安捷伦公 司) ; 密思博超纯水器; SQP 电子分析天平 ［十万 分之一，赛多利斯科学仪器 ( 北京) 有限公司］; TGL-16G 离 心 机 ( 上海安亭科学仪器厂 ) ; KQ5200B 超声波清洗器 ( 昆山市超声仪器有限公 司) ; 一恒HWS-26 电热恒温水浴锅 ( 上海一恒科学仪器有限公司) 。
1. 2 试药
紫花地丁 ( 批号 20180501) 、板蓝根 ( 批号 20180101) 、蒲公英 ( 批号 20180201) 、半 边莲 ( 批号 20180201) 均由南宁市景昌中药饮片 有限公司提供，经广西中医药大学鉴定教研室蔡毅 教授鉴定为正品。表告依春 ( 批号 171206) 、单咖 啡酰 基 酒 石 ( 批 号 171130 ) 、 菊 苣 酸 ( 批 号 171130) 对照品 ( 上海融禾医药科技有限公司) ; 秦皮乙素 ( 批号 110741-200102) 、咖啡酸 ( 批号 110885-201708) 对照品 ( 中国食品药品检定研究 院) ，含有量均大于 98%。二丁颗粒共 10 批，批号 171193 ( 20 g /袋) ，购自四川古蔺肝苏药业有限公司; 批 号 180120 ( 20 g /袋 ) 、 180401 ( 20 g /袋 ) 、 181410D ( 20 g /袋) 、180604D ( 无糖，4 g /袋) 、 180317 ( 20 g /袋) ，购自修正药业集团长春高新制 药 有 限 公 司; 批 号 180911 ( 无 糖，4 g /袋 ) 、 180918 ( 无 糖，4 g /袋 ) 、180903 ( 20 g /袋 ) 、 180926 ( 20 g /袋) ，由广西中医药大学药学中心实 验室制备。 甲醇、乙腈为色谱纯; 乙醇等其他试剂均为分 析纯; 水为超纯水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Agilent Poroshell 120 EC-C18色谱 柱 ( 250 mm × 4. 6 mm，4. 0 μm) ; 流 动 相 乙 腈 ( A) -0. 1% 磷 酸 ( B) ，梯 度 洗 脱 ( 0 ～ 12 min， 5% ～ 10% A; 12 ～ 20 min，10% A; 20 ～ 30 min，10% ～17%A; 30～50 min，17% ～ 24% A) ; 体积流 量 1. 0 mL /min; 检测波长 242 nm ( 0 ～ 12 min) 、 330 nm ( 12～50 min) ; 柱温 30 ℃ ; 进样量 5 μL。
2. 2 溶液制备
2. 2. 1 对照品溶液
精密称取各对照品适量，置 于 5 个 10 mL 量瓶中，甲醇溶解并定容，制得贮备 液，取适量置于同一量瓶中，甲醇稀释，制成分别 含表告依春、单咖啡酰基酒石酸、秦皮乙素、咖啡 酸、菊苣酸 10. 8、60. 4、111、11. 1、28. 0 μg /mL， 即得。
2. 2. 2 供试品溶液
精密称取相当于原药材 2 ～ 5 g的颗粒适量，置于 100 mL 具塞锥形瓶中，加入 40 mL 60%乙醇回流 45 min，滤过，滤液挥干，残 渣用 60%乙醇溶解并定容至 10 mL，13 000 r/min 离心，取上清液过微孔滤膜，即得。
2. 2. 3 阴性样品溶液
按处方工艺制备缺紫花地 丁、板蓝根、蒲公英、半边莲的其他药材各 1 份， 按 “2. 2. 2”项下方法制备，即得。
2. 3 HPLC 指纹图谱
2. 3. 1 稳定性试验
取颗粒( 批号 180926) 2. 5 g， 按 “2. 2. 2”项下方法制备供试品溶液，于 0、2、 4、8、12、24 h 在 “2. 1” 项色谱条件下各进样 5 μL 测定。以 4 号峰 ( 秦皮乙素) 保留时间和色 谱峰面积为参照，测得其余 10 个色谱峰相对保留 时间 ＲSD 在 0. 03% ～0. 17%之间，相对峰面积 ＲSD 在 0. 27% ～2. 8%之间，表明溶液在 24 h 内稳定性 良好，符合指纹图谱测定要求。
2. 3. 2 精密度试验
取 供 试 品 溶 液 ( 批 号 180926) ，在 “2. 1”项色谱条件下进样测定 6 次。 以 4 号峰 ( 秦皮乙素) 保留时间和色谱峰面积为 参照，测得其余 10 个色谱峰相对保留时间 ＲSD 在 0. 05% ～0. 29%之间，相对峰面积 ＲSD 在 0. 37% ～ 2. 0%之间，表明仪器精密度良好，符合指纹图谱 测定要求。
2. 3. 3 重复性试验
取 同 一 批 颗 粒 ( 批 号 180926) 2. 5 g，共 6 份，按 “2. 2. 2”项下方法制 备 6 份供试品溶液，在 “2. 1”项色谱条件下各进 样 5 μL 测定。以 4 号峰 ( 秦皮乙素) 保留时间和 色谱峰面积为参照，测得其余 10 个峰相对保留时 间 ＲSD 在 0. 02% ～ 0. 13%之间，相对峰面积 ＲSD 在 0. 30% ～ 1. 6% 之间，表明该方法重复性良好， 符合指纹图谱测定要求。
2. 3. 4 建立方法
取 10 批颗粒适量，按“2. 2. 2” 项下方法制备供试品溶液，在 “2. 1”项色谱条件下进样测定，再采用 《中药色谱指纹 图谱相似度评价系统》 ( 2012. 130723 版) 对指纹 图谱进行分析，发现 11 个共有峰 ，其中 4 号峰为秦皮乙素，是君药紫花地丁主要活性成分，该色谱峰分离度较好，响应值较高，保留时间适 宜，故选择其为参照峰。可知各批 样品相似度均在 0. 90 以上，表明指标成分一致性 较好。
3 讨论
考察了甲醇-水、乙 腈-水、甲醇-0. 1% 磷酸、乙腈-0. 1% 甲酸、乙腈0. 1%冰乙酸、乙腈-0. 1%磷酸、乙腈-0. 08%磷酸、 乙腈-0. 12%磷酸流动相，发现乙腈-0. 1%磷酸洗脱 时各成分色谱峰分离度较好，而且出峰时间适中; 考察 了 Agilent Poroshell 120 EC-C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，4. 0 μm) 、Agilent ZOＲBAX Eclipse XDBC18 ( 4. 6 mm × 250 mm，5. 0 μm ) 、Phenomenex Gemini-C18 ( 250 mm×4. 6 mm，5 μm) 色谱柱，发 现 Agilent Poroshell 120 EC-C18 色谱柱分离度、峰 形、柱效较好; 考察了柱温 25、30、35 ℃，发现 30 ℃时分离度、峰形较好; 考察了体积流量 0. 8、 1. 0、1. 2 mL /min，发现 1. 0 mL /min 时洗脱效果较 好; 采用 DAD 检测器在 190 ～ 400 nm 波长处进行 扫描，发现表告依春、单咖啡酰基酒石酸、秦皮乙 素、咖啡 酸、菊苣酸最佳吸收波长分别为 242、 330、344、322、330 nm，为了使各成分均能获得 尽可能高的测量灵敏度，本实验采用双波长切换时 间序列采样方式进行检测，即 0 ～ 12 min 242 nm， 12～50 min 330 nm，发现在此条件下各成分吸收及 峰型较理想，并可达到良好的分离效果。综上所 述，最优色谱条件为 Agilent Poroshell 120 EC-C18色 谱柱 ( 250 mm×4. 6 mm，4. 0 μm) ; 流动相乙腈0. 1%磷酸，梯度洗脱; 体积流量1. 0 mL /min; 检 测波长 242、330 nm; 柱温 30 ℃。
4 结论
建立二丁颗粒 HPLC 指纹图谱，并测定 表告依春、单咖啡酰基酒石酸、秦皮乙素、咖啡 酸、菊苣酸含有量，发现指纹图谱专属性较强，测 定方法简便准确，重复性较好，对提高该制剂质量 标准有着积极的参考意义。
免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。